[发明专利]同型半胱氨酸的检测方法及其诊断试剂盒

权利要求书

1.一种同型半胱氨酸的检测方法，其特征在于：包括以下步骤：

（1）选择同型半胱氨酸HCY的甲基转移酶产物S-腺苷-L-同型半胱氨酸SAH的特异性抗体，即抗SAH抗体；

（2）针对（1）中所选择的抗SAH抗体，制备能够与该抗SAH抗体特异性结合的SAH-DNA引物，并选择与该SAH-DNA引物中的DNA引物互补的DNA模板，建立DNA多聚酶反应体系；

（3）选择DNA多聚酶；

（4）将待测样品中未知量的HCY在过量S-腺苷-L-蛋氨酸的存在下由甲基转移酶转变成SAH，将该生成的SAH和已知并过量的（1）中所述抗SAH抗体结合；将该已知并过量抗SAH抗体中未与所述生成的SAH结合的部分与继续添加的已知量并过量（2）中所述SAH-DNA引物结合，所形成的结合物将抑制（3）中所述DNA多聚酶的活性并阻止新的双链DNA的形成；

（5）通过测定形成的新的双链DNA的含量来检测样品中HCY的含量。

2.根据权利要求1所述的同型半胱氨酸的检测方法，其特征在于：制备SAH-DNA引物时通过在合适的DNA引物上引入能够与SAH交联的可交联基团。

3.根据权利要求2所述的同型半胱氨酸的检测方法，其特征在于：所述可交联基团为羧基，该羧基能够被活化成活化酯基团，该活化酯基团能够和SAH中的氨基形成肽键。

4.根据权利要求1所述的同型半胱氨酸的检测方法，其特征在于：所述SAH-DNA引物在同一时刻仅能与抗SAH抗体和DNA多聚酶中的一种相结合。

5.根据权利要求1所述的同型半胱氨酸的检测方法，其特征在于：所述抗SAH抗体和SAH的结合能够抑制抗SAH抗体和SAH-DNA引物的结合，并恢复DNA多聚酶的活性，合成新的双链DNA，并释放出焦磷酸。

6.根据权利要求1所述的同型半胱氨酸的检测方法，其特征在于：所述形成的新的双链DNA的含量能够通过荧光染料标记来测定。

7.根据权利要求1所述的同型半胱氨酸的检测方法，其特征在于：所述DNA多聚酶的活性能够通过新的双链DNA形成时所释放焦磷酸的含量来测定。

8.根据权利要求1至7中任一权利要求所述的同型半胱氨酸的检测方法，其特征在于：待检样品为血清、血浆、唾液、尿液和上述物质提取物中的一种。

9.根据权利要求1所述检测方法建立的同型半胱氨酸的诊断试剂盒，其特征在于：包括第一试剂、第二试剂和第三试剂，所述第一试剂包括甲基转移酶、抗SAH抗体、dNTP和S-腺苷-L-蛋氨酸；所述第二试剂包括SAH-DNA引物和与其互补的DNA模板；所述第三试剂包括DNA多聚酶。

10.根据权利要求9所述的同型半胱氨酸的诊断试剂盒，其特征在于：所述第一试剂、第二试剂和第三试剂均为均相试剂。