[发明专利]基于聚合酶链反应的金-金核壳结构二聚体的手性研究的方法

权利要求书

1.一种基于聚合酶链反应的金-金核壳结构二聚体的手性研究的方法，其特征在于包括具有不同金壳厚度1nm-10nm的大金纳米粒子和具有不同金壳厚度1nm-10nm的小金纳米粒子的合成，其表面的引物偶联，金-金核壳结构纳米粒子-引物偶联物的稳定，金-金核壳结构二聚体的PCR组装，组装产物的手性性质表征；

具体步骤：

（1）不同金壳厚度1nm-10nm的25nm金纳米粒子合成

采用柠檬酸三钠还原氯金酸合成25nm金纳米粒子，通过调节10μL～200μL5mM氯金酸的量达到合成不同金壳厚度1nm-10nm的25nm金纳米粒子；

（2）不同金壳厚度1nm-10nm的10nm金纳米粒子合成

采用单宁酸还原氯金酸合成10nm金纳米粒子，通过调节10μL～200μL5mM氯金酸的量达到合成不同金壳厚度1nm-10nm的10nm金纳米粒子；

（3）金-金核壳结构纳米粒子和引物的偶联

将新合成的25nm Au-Au核壳结构纳米粒子和巯基修饰的上游引物F-primer偶联，将新合成的10nm Au-Au核壳结构纳米粒子和巯基修饰的下游引物R-primer偶联，分别形成金-金核壳结构纳米粒子-引物偶联物；

（4）金-金核壳结构纳米粒子-引物偶联物的稳定

将金-金核壳结构纳米粒子-引物偶联物和巯基修饰的聚乙二醇PEG₁₀₀₀反应，以达到稳定纳米粒子；

（5）金-金核壳结构二聚体的PCR组装及组装产物的手性性质表征

以λDNA为模板，通过优化PCR扩增条件，将金-金核壳结构纳米粒子-引物偶联物在PCR体系中进行不同循环数2～20个循环的组装，离心浓缩，得组装产物，进行TEM和CD的表征。

2.根据权利要求1所述基于聚合酶链反应的金-金核壳结构二聚体的手性研究的方法，其特征在于具有不同金壳厚度的金纳米粒子的合成：

采用传统方法柠檬酸三钠还原氯金酸合成25nm金纳米粒子；

将500μL0.1M的磷酸盐缓冲液和50μL1%聚乙烯吡咯烷酮溶液，混合均匀，加入50μL新合成的2nM25nm金纳米粒子，震荡均匀，加入10μL～200μL5mM的氯金酸溶液和10μL10mM的盐酸羟胺溶液，摇晃3h，离心去除上清，将沉淀分散在50μL的超纯水中，得金壳厚度1nm～10nm的25nm Au-Au；随着氯金酸溶液量的加大，金壳的厚度越大；

采用传统方法单宁酸还原氯金酸合成10nm金纳米粒子；

将500μL0.1M的磷酸盐缓冲液和50μL1%聚乙烯吡咯烷酮溶液，混合均匀，加入50μL新合成的10nM10nm金纳米粒子，震荡均匀，加入10μL～200μL5mM的氯金酸溶液和10μL10mM的盐酸羟胺溶液，摇晃3h，离心去除上清，将沉淀分散在50μL的超纯水中，得10nm Au-Au；随着氯金酸溶液量的加大，金壳的厚度越大；

通过调节10μL-200μL5mM氯金酸的量达到具合成不同金壳厚度1nm-10nm的25nm金-金核壳结构纳米粒子和不同金壳厚度1nm-10nm的10nm金-金核壳结构纳米粒子。

3.根据权利要求1所述基于聚合酶链反应的金-金核壳结构二聚体的手性研究的方法，其特征在于金-金核壳结构纳米粒子和引物的偶联：

（ⅰ）25nm金-金核壳结构纳米粒子和上游引物F-primer偶联：将制备好的50μL25nm金-金核壳结构纳米粒子加入50μL200nM的F-primer，混匀，室温反应12h；

（ⅱ）10nm金-金核壳结构纳米粒子和下游引物R-primer偶联：将制备好的50μL10nm金-金核壳结构纳米粒子加入50μL1μM的R-primer，混匀，室温反应12h；

（ⅲ）将上述（ⅰ）和（ⅱ）步骤中反应溶液分别以7000rpm及13000rpm离心10min，弃上清，后用50μL的超纯水分散沉淀，4℃保藏、待用；

F-primer：5’-SH-(CH₂)₆-TGGCTGACCC TGATGAGTTC G-3’，扩增长度为50bp；

R-primer：5’-SH-(CH₂)₆-GGGCCATGAT TACGCCAGTT-3’，扩增长度为50bp。