[发明专利]一种烟草抗旱种质的快速、高通量筛选方法

说明书

技术领域

本发明涉及烟草种质筛选方法，具体是一种烟草抗旱种质的快速、高通量筛选方法。

背景技术

干旱是影响植物生长发育的主要环境因子之一。烟草在生长过程中，特别是从团棵期进入旺长期时常常遭遇干旱，干旱已经成为影响其营养生长的重要因素。因此，通过对烟草抗旱材料的筛选、利用，可望研究植物的抗旱机制，选育抗旱的烟草品种，以解决生产中的干旱问题。

目前，前人在抗旱研究中得出了一些行之有效的抗旱筛选方法，这些方法有田间直接鉴定、旱棚鉴定、盆栽鉴定、室内模拟干旱发芽期鉴定等等，由于田间直接鉴定、旱棚鉴定与盆栽鉴定受自然条件、作物自身发育特性影响较大，试验误差较大；相比而言，由于室内模拟干旱具有条件可控性强、试验周期短、方法简单、适用于大批量筛选、鉴定，所以，室内模拟干旱的方法是较为常用的方法，但由于处理方法、测试时间和评价标准不同，试验的结论也存在较大的误差。 

发明内容

本发明针对现有技术存在的不足之处，提供一种烟草抗旱种质的快速、高通量筛选方法，该方法通过在种子发芽后的小苗期，采用高浓度、高分子量的聚乙二醇（PEG）渗透溶液模拟小苗生长的干旱胁迫条件，研究在高渗透溶液下烟草种子的根生长量和萎焉植株率，以减小误差，提高筛选方法的准确性。

本发明实现发明目的采用如下技术方案：

一种烟草抗旱种质的快速、高通量筛选方法，其特点在于按如下步骤进行：

（1）烟草种子的消毒处理

精选大小一致、无破损的种子，用体积浓度8-12%H₂O₂处理10min，再用蒸馏水洗3-4次后，晾干，待用；

（2）烟草种子发芽试验

培养皿中以双层滤纸为发芽床，然后放入步骤（1）消毒处理过的种子放入培养皿中，用蒸馏水进行发芽，盖好培养皿后，放入昼温度为28℃、10h，夜温度为25℃、14h的气候培养箱进行培养；

（3）定苗、控水

连续培养7-10天后，取出，进行定苗，剔除未发芽种子、弱苗，留长势较好的小苗，倾斜放置培养皿，控水至滤纸吸水至饱和，用移液器吸出多余水份；

（4）PEG-6000处理

加入等同滤纸吸收饱和所需蒸馏水量的50%PEG-6000，至皿中PEG-6000终质量浓度为25%，然后盖好培养皿，用石蜡膜封口，放入昼温度为28℃、10h，夜温度为25℃、14h的气候培养箱进行培养；以蒸馏水处理为对照；

（5）烟草萎焉比率和根长变化量的测定

步骤(3)长势较好的小苗经步骤（4）的气候培养箱培连续培养5天后，取出，记录烟草小苗萎焉植株数，测定小苗的根长，计算小苗萎焉植株数和根长生长变化量。

计算公式①、②

① 萎焉率（%）=（萎焉小苗植株数/小苗总数）×100%

② 根长伸长比（%）=（PEG处理后小苗根长-PEG处理前小苗根长）/（PEG处理前小苗根长）×100%

其中，对不同的材料，萎焉率越小、根长变化比越大，表明材料的抗旱性越好。

与已有技术相比，本发明有益效果体现在：

本发明通过对种子发芽后的萎焉率和根长伸长比比较来筛选抗旱烟草材料，其操作简单，快速，误差小，准确性好，能有效、快速的进行烟草抗旱材料的大批量筛选。

附图说明

图1是本发明筛选方法中采用PEG-6000处理条件下的不同品种（系）小苗萎焉率比较。

图2是本发明筛选方法中采用PEG-6000处理条件下的不同烟草品种根长伸长比比较。

图3是传统筛选方法中采用 PEG-6000处理条件下的不同品种发芽率比较。

具体实施方式

下面结合具体实施方式对本发明做进一步详细的说明：

实施例1

本发明具体实施方式采用的材料及仪器：

仪器：人工气候培养箱、移液器、培养皿、直尺

材料：PEG-6000、蒸馏水、滤纸、石蜡膜

如下实施例材料：歪把子、云烟87、安选一号、云烟97、K326、长脖黄、NC89、中烟100、吉烟9号、6517、NC82、Coker411、春雷三号、中烟14；均由安徽省农业科学院烟草研究所提供。

实施例：

（1）烟草种子的消毒处理：