[发明专利]一种替度鲁肽的纯化方法

权利要求书

1.一种替度鲁肽的纯化方法，其特征在于，包括以下步骤：

步骤1、将替度鲁肽粗品用乙腈-醋酸混合水溶液溶解，然后加水稀释至乙腈和醋酸的体积百分比之和为10%-30%，得到替度鲁肽粗品溶液；

步骤2、将替度鲁肽粗品溶液用RP-HPLC进行梯度洗脱20-40min，从替度鲁肽主峰出现开始至替度鲁肽主峰结束分10-20次收集替度鲁肽流份，分离出替度鲁肽纯度在95%以上的替度鲁肽流份备用，分离出纯度在90%-95%的替度鲁肽流份进行下步纯化；

其中，所述梯度洗脱以pH值为5.5-6.5的硫酸-高氯酸混合水溶液为流动相A，以乙腈为流动相B，乙腈浓度以体积百分比计从25%升至45%；

步骤3、将步骤2收集的替度鲁肽纯度在90%-95%的流份再次按照步骤2的方法进行RP-HPLC梯度洗脱，分离出替度鲁肽纯度在95%以上的替度鲁肽流份备用；

步骤4、混合步骤2和步骤3分离的替度鲁肽纯度在95%以上的替度鲁肽流份，调整替度鲁肽流份中乙腈体积百分比低于15%、pH值为6-7后静置析晶，离心后所得固体即为替度鲁肽纯品。

2.根据权利要求1所述方法，其特征在于，步骤1所述乙腈-醋酸混合水溶液由体积百分比为30%-60%的醋酸、5%-20%乙腈和余量水组成。

3.根据权利要求1所述方法，其特征在于，步骤1所述替度鲁肽粗品和乙腈-醋酸混合水溶液的质量体积比为20g-50g:1L。

4.根据权利要求1所述方法，其特征在于，步骤2所述硫酸-高氯酸混合水溶液由体积百分比为0.1%-0.4%的硫酸、0.1%-0.4%高氯酸和余量水组成。

5.根据权利要求1所述方法，其特征在于，步骤2和步骤4所述pH值用氨水调节。

6.根据权利要求1所述方法，其特征在于，步骤4所述静置析晶为放置到2℃-8℃下2h以上析晶。

7.根据权利要求1所述方法，其特征在于，步骤2所述梯度洗脱采用十八烷基硅烷键合硅胶为固定相。

8.根据权利要求1-7任意一项所述方法，其特征在于，还包括将替度鲁肽纯品用RP-HPLC转醋酸盐步骤，具体为：

用磷酸水溶液溶解替度鲁肽纯品，然后加水稀释一倍后，以十八烷基硅烷键合硅胶为固定相，先以乙腈为流动相B、以体积百分比为0.1%-0.8%的醋酸铵溶液为流动相A进行进行冲洗，然后再以乙腈为流动B相、醋酸水溶液为流动A相进行RP-HPLC梯度洗脱15min-30min，收集从替度鲁肽醋酸盐主峰出现开始至替度鲁肽醋酸盐主峰结束之间的流份，浓缩、冷冻干燥后即为替度鲁肽醋酸盐纯品。

9.根据权利要求8所述方法，其特征在于，所述冲洗中乙腈终浓度为醋酸铵溶液和乙腈体积之和的3%-15%。

10.根据权利要求8所述方法，其特征在于，所述梯度洗脱中醋酸水溶液中的醋酸体积百分比为0.1%-0.4%，乙腈的浓度以体积百分比计从10%升至55%。