[发明专利]人源化小鼠模型的构建方法和应用

权利要求书

1.一种多核苷酸序列，其特征在于，所述多核苷酸序列含有人Nbs1及其上下游长40－60kb的序列，其中，所述人Nbs1基因为人Nbs1^c.657del5基因。

2.如权利要求1所述的多核苷酸序列，其特征在于，所述多核苷酸序列为BAC载体。

3.权利要求1或2所述的多核苷酸序列在制备构建Nbs1^c.657del5人源化转基因小鼠及其后代用的物质中的用途。

4.一种细胞系或原代细胞培养物、组织或器官型切片培养物、组织外植体或器官外植体或其培养物、或组织提取物或细胞提取物，其特征在于，

所述细胞系或原代细胞培养物、组织或器官型切片培养物、组织外植体或器官外植体或其培养物、和组织提取物或细胞提取物来自经权利要求2所述的BAC载体转基因的Nbs1^c.657del5人源化转基因小鼠或其后代；和

所述细胞系或原代细胞培养物、组织或器官型切片培养物、组织外植体或器官外植体或其培养物、和组织提取物或细胞提取物的特征是人源Nbs1呈不同水平转录的、且BAC载体上同时存在的CALB1和DECR1基本不表达的、以及具有稳定的Nbs1^c.657del5转基因。

5.如权利要求4所述的细胞系或原代细胞培养物、组织或器官型切片培养物、组织外植体或器官外植体或其培养物、或组织提取物或细胞提取物，其特征在于，所述Nbs1^c.657del5人源化转基因小鼠或其后代具有以下一种或多种特征：

（1）人源Nbs1呈不同水平转录；

（2）BAC载体上同时存在的CALB1和DECR1基本不表达，或表达水平非常微弱，基本可忽略；

（3）具有稳定的Nbs1^c.657del5转基因特征；

（4）人源Nbs1在胸腺、脾脏、睾丸、脑中高水平地转录，在肝脏、肌肉、心脏、肾脏、肺脏和结肠中被活跃地转录，其转录特征与内源Nbs1一致，参与到相关功能的信号通路中；

（5）NBS1^p70在所述小鼠或其后代的胚胎期、成年期的胸腺组织、脾脏组织和激活的B细胞中表达；其表达水平接近内源NBS1或高于内源NBS1的表达水平；

（6）具有发育迟缓、体长均匀缩短和骨发育异常（如上肢或下肢脚趾弯曲）的表型，与临床上NBS病人的症状类似；和

（7）在至少12个月的生长期间内不发生自发肿瘤。

6.权利要求4或5所述的细胞系或原代细胞培养物、组织或器官型切片培养物、组织外植体或器官外植体或其培养物、或组织提取物或细胞提取物的用途，包括用于检测化合物在如下实验或疾病中的效果或用来研究可诱发下述疾病化合物的敏感性，

其中，所述实验选自：药物临床前安全性评价；基因毒性和非基因毒性致癌物或抑癌物的广泛性检测；双链断裂修复失常与癌症或其它相关疾病发生的关系研究；免疫毒理学实验；

所述疾病选自：发育障碍，如头小畸形、发育迟缓；面部特征异常，如前额退化、下颌骨退化、耳大、头发稀疏；骨发育异常，如趾畸形、髋骨发育不良、骶骨发育不良；性发育障碍，如卵巢早熟性发育不足、雄性不育；易反复感染，如窦炎、肺炎；免疫缺陷，如体液免疫缺陷、细胞免疫缺陷；脑发育异常，如脑积水、大脑额叶发育不良；认知功能变差；皮肤异常，如浅褐色斑点、白癜风斑点。

7.权利要求4或5所述的细胞系或原代细胞培养物、组织或器官型切片培养物、组织外植体或器官外植体或其培养物、或组织提取物或细胞提取物的用途，包括用于评定环境致癌因子（如电离辐射、核辐射和紫外辐射等污染物）的强度是否达到了致癌水平、分析人和鼠源Nbs1功能的一致和差异性、确定作用于NBS1^p70的化合物的特异性、研究NBS1^p70或其他与NBS1^p70相关联细胞成分的核内转运和鉴定NBS1^p70的未知配体。