[发明专利]可用于检测与2型糖尿病相关的GCK基因甲基化程度的试剂盒及其应用

说明书

技术领域

本发明涉及一种辅助诊断2型糖尿病的检测试剂盒，尤其是涉及一种可用于检测与2型糖尿病相关的GCK基因甲基化程度的试剂盒及其应用

背景技术

糖尿病是血中胰岛素绝对或相对不足，导致血糖过高，出现糖尿，进而引起脂肪和蛋白质代谢紊乱，临床上可出现多尿、烦渴、多饮、多食，消瘦等表现，重者容易发生酮症酸中毒等急性并发症或血管、神经等慢性并发症。糖尿病是一种常见的内分泌代谢性疾病，其患病率随着生活条件的改善生活水平提高都呈逐渐增长的趋势。据统计，目前中国糖尿病患病人数接近一亿，患病率高达9.7%。糖尿病不是单一疾病，是由遗传及环境因素在内的多种因素共同作用的结果。其中2 型糖尿病发病人数约占糖尿病总发病人数的97%。2型糖尿病过去主要在超过40岁的成年人中发病 ，而现在2型糖尿病的发病正趋向低龄化。葡萄糖激酶（GCK）是影响2型糖尿病的重要基因，葡萄糖激酶（GCK）基因编码葡萄糖激酶的生成，葡萄糖激酶可催化葡萄糖转变成6-磷酸葡萄糖，是葡萄糖代谢的关键酶和限速酶。当GCK基因编码的葡萄糖激酶生成减少时，葡萄糖代谢会受影响，也不能维持血糖稳态。

目前国内外对糖尿病机制的研究也越来越多。有研究背景表明基因的甲基化是在不改变DNA序列情况下，影响基因表达。但目前没有研究阐述证明基因甲基化和与2型糖尿病存在相关性。同时，国内外还没有公开任何关于可用于检测与2型糖尿病相关的GCK基因甲基化程度的试剂盒的相关研究报道。

发明内容

本发明所要解决的技术问题是提供一种可用于检测与2型糖尿病相关的GCK基因甲基化程度的试剂盒及其应用，其中GCK基因甲基化水平与男性人群2型糖尿病患病率呈正相关，检测效率高，针对性强。

 本发明解决上述技术问题所采用的技术方案为：一种可用于检测与2型糖尿病相关的GCK基因甲基化程度的试剂盒，该试剂盒包括一对GCK基因甲基化特异性扩增引物及甲基化特异性测序引物，其中

所述的甲基化特异性扩增上游引物的核苷酸序列如SEQ ID NO.1所示

5’-TGGATGGTTTAGTGTATAAGTTGTATT-3’

所述的甲基化特异性扩增下游引物的核苷酸序列如SEQ ID NO.2所示：

5’-Biotin-CACCTCATCCTCCACATTCAT-3’

所述的甲基化特异性测序引物如SEQ ID NO.3所示

5’-AAGTGGGGTTTAAAAAG-3’。

一种可用于检测与2型糖尿病相关的GCK基因甲基化程度的试剂盒的应用，在外周血检测中，该试剂盒可用于男性人群2型糖尿病的辅助诊断、检测或筛查药物中。

与现有技术相比，本发明的优点在于：本发明首次公开了可用于检测与2型糖尿病相关的GCK基因甲基化程度的试剂盒及其应用，GCK基因高甲基化水平导致GCK基因的低表达，从而使与糖尿病密切相关的葡萄糖激酶表达减少，从而使体内血糖发生变化导致胰岛素抵抗及糖尿病的发生。因此，GCK基因甲基化水平与2糖尿病的发生型呈正相关，以检测GCK基因甲基化水平为基础的诊断试剂盒可以方便快捷地在分子水平上实现对2型糖尿病的检测，检测效率高，针对性强，同时，以GCK基因甲基化为靶点的药物有望成为2型糖尿病辅助诊断、检测和筛选的一种新手段。

附图说明

图1为GCK基因被检测序列所在区域以及所检测的4个CpG点的关联分析结果(例如CpG1与CpG2的相关系数为0.685，CpG2与CpG3的相关系数为0.765)；

 图2为甲基化水平检测结果示例，图中所示百分数为对应CpG位点的甲基化程度，如图示CpG1到CpG4的甲基化程度分别为43%，42%，53%，44%，图中阴影部分显示的是对应CpG位点的信号强度，结合该位点附近碱基种类可分析得到其甲基化水平（即阴影框对应的上方数字）；

图3为在男性人群及女性人群中胆固醇与CpG4岛的DNA甲基化程度的相关性线性图；

图4为总人群中关于CpG4岛及CpG1-3岛的甲基化水平的ROC曲线图；

图5为男性人群中关于CpG4岛及CpG1-3岛的甲基化水平的ROC曲线图；

图6为女性人群中关于CpG4岛及CpG1-3岛的甲基化水平的ROC曲线图。

具体实施方式

 以下结合附图实施例对本发明作进一步详细描述。

具体实施例

1、研究对象的收集