[发明专利]一种快速制备高密度高纯藻种的方法

权利要求书

1.一种快速制备高密度高纯藻种的方法，其特征在于：保种在固体培养基上的藻种依次转移到灭菌的三角瓶、柱形透明玻璃培养管和平板光生物反应器中，摇动或通气培养，通入气体为CO₂和空气的混合气体，其中CO₂所占体积比为0.2-2％，体积比通过调节空气和CO₂流速由流量计控制，CO₂气体来自高压钢瓶或其它含高浓度CO₂的气体，CO₂的比例以控制溶液pH在6.5-8.5为宜，低于此范围，则降低浓度，高于此范围则增加浓度；温度控制20-30℃，24h供光，光强为5-100μmol photons m^-2s^-1,pH 7-12；所用高效液体培养基为在蒸馏水或经放置12h的自来水中添加以下营养盐配制而成：KNO₃ 0.125-1.0gL^-1，NaNO₃ 0.125-1.0gL^-1，KH₂PO₄ 0.04-0.5gL^-1，Na₂HPO₄ 0.05-0.5gL^-1，MgSO₄·7H₂O 0.06-0.3gL^-1，CaCl₂ 0.02-0.1gL^-1，NaHCO₃ 0.02-3gL^-1,FeCl₂ 3-20mgL^-1，Na₂EDTA 1-10mgL^-1,H₃BO₃ 1-10mgL^-1，MnCl₂·4H₂O 0.5-5mgL^-1,ZnSO₄·7H₂O 0.1-0.6mgL^-1,CuSO₄·5H₂O 0.02-0.2mgL^-1,Na₂MoO₄·2H₂O 0.01-0.8mgL^-1，CoCl₂·6H₂O 0.02-4mgL^-1；配制时KNO₃、NaNO₃、KH₂PO₄和Na₂HPO₄依次溶解于蒸馏水中配成100X母液1，MgSO₄·7H₂O、CaCl₂和FeCl₂依次溶解于蒸馏水中配制成1000X的母液2，NaHCO₃配成1000X母液3，Na₂EDTA,H₃BO₃、MnCl₂·4H₂O、ZnSO₄·7H₂O、CuSO₄·5H₂O、Na₂MoO₄·2H₂O和CoCl₂·6H₂O依次溶解于蒸馏水中配制成1000X的母液4；配制培养基时取10ml母液1，1ml母液2、1ml母液3和1ml溶液4依次加入600ml水中，待充分搅拌后再加入另外一种，防止沉淀产生，最后补水至1L；

所述藻为单细胞绿藻或蓝藻，或形成群体的绿藻或蓝藻；对于形成较大群体的藻，用灭菌的匀浆器或研钵在不添加石英砂等辅助物的情况下轻轻研磨，以获得单细胞或更小群体的接种物。

2.根据权利要求1所述的一种快速制备高密度高纯藻种的方法，其特征在于：所述的三角瓶和玻璃管采用高温高压法灭菌，光生物反应器则在清洗晾干后，移入经过紫外线杀菌的培养室内，在内壁喷洒75％的酒精进行灭菌，待晾干后，封口备用。