[发明专利]利用双向电泳和MALDI-TOF-MS技术获得小麦根相关抗旱蛋白的方法无效
| 申请号： | 201310082633.7 | 申请日： | 2013-03-09 |
| 公开（公告）号： | CN103278453A | 公开（公告）日： | 2013-09-04 |
| 发明（设计）人： | 叶景秀;姚有华;谢德庆 | 申请（专利权）人： | 青海省农林科学院 |
| 主分类号： | G01N21/25 | 分类号： | G01N21/25 |
| 代理公司： | 暂无信息 | 代理人： | 暂无信息 |
| 地址： | 810016 *** | 国省代码： | 青海;63 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 利用 双向 电泳 maldi tof ms 技术 获得 麦根 相关 抗旱 蛋白 方法 | ||
1.一种利用双向电泳和MALDI-TOF-MS技术获得小麦根相关抗旱蛋白的方法，其特征在于，包括以下步骤：(1)材料处理：对春小麦品种青春38幼苗分别进行PEG6000干旱胁迫、复水作为处理，以相对应的正常供水作为对照，分别提取根蛋白质，进行双向电泳；
(2)双向电泳：将含样品蛋白质900μg水化液共350μl沿PROTAIN IEF Cell型电泳仪聚焦槽内连续加入；将17cm IPG胶条胶面朝下覆盖在样品上，被动吸收1h后，加2ml矿物油覆盖胶条；第二向SDS-PAGE用11％凝胶；凝胶染色采用胶体考马斯亮蓝染色法，其过程依次是：超纯水洗2次，每次10min；固定液固定2.5h；超纯水快速冲洗2次；染色液染色12.5h；脱色液脱色1h；超纯水水洗约4h，每30min换水一次，至斑点清晰为准；
(3)图谱分析：染色后的2-DE凝胶应用UMAX PowerLook2100XL型光密度扫描仪透射扫描获取图像，分辨率设为600dpi，在PDQuest2DE8.0.1分析软件的辅助下，定义蛋白质点的大小、强弱，检测和统计蛋白质点数目，计算蛋白质点的分子量和等电点，选取表达水平相差2倍以上的差异蛋白质点进行质谱分析；
(4)MALDI-TOF-MS：差异蛋白质点经胶内酶解后，用ultraflex TOF/TOF进行MALDI-TOF肽质谱指纹图分析，所得PMF数据通过Mascot软件检索蛋白质数据库进行鉴定。
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