[发明专利]快速测定原料血浆醇沉过程中免疫球蛋白G含量的方法

说明书

技术领域

本发明涉及一种测量方法，具体涉及一种利用近红外光谱分析技术快速测定原料血浆醇沉过程中免疫球蛋白G含量的方法。

背景技术

免疫球蛋白G（immunoglobulin G，IgG）是静脉注射人免疫球蛋白（IntravenousImmunoglobulin G，IVIG）的主要成分，主要用于治疗原发性体液免疫缺陷、特发性血小板减少性紫癜、川崎综合征、格林.巴利综合征和新生儿ABO溶血症，此外，IVIG还可用于重症肌无力、系统性红斑狼疮等。

IVIG独特的药理活性使得其需求量急剧增加，国内外所生产产品多处于供不应求阶段。增加生产量提高IgG收率不仅是解决国内外现状的有效途径，也有利于稀缺生物资源原料血浆的综合开发利用。从原料血浆中以乙醇沉淀得到FⅠ+Ⅱ+Ⅲ是生产IVIG的重要环节，其中上清液中残留的IgG含量是评价醇沉效果的重要指标，对于提高IVIG收率，综合利用血浆具有重要意义。目前IgG的含量测定方法主要包括免疫比浊法、免疫扩散法、紫外分光光度法等，这些方法耗费试剂、方法复杂，过程繁琐，测试费用昂贵，操作时间长，耗时耗力，操作复杂，不能满足实际生产过程中快速分析的需要，因此提出一种快速的分析方法显得尤为重要。

发明内容

本发明的目的是为克服上述现有技术的不足，提供一种快速测定原料血浆醇沉过程中免疫球蛋白G含量的方法，操作简单，分析快速，能准确测定醇沉液中IgG的含量，对于提高血浆综合利用率、静注人免疫球蛋白G工艺优化和醇沉过程控制提供数据支持。

为实现上述目的，本发明采用下述技术方案：

一种快速测定原料血浆醇沉过程中免疫球蛋白G含量的方法，具体步骤如下：

（1）每间隔10～15min从条件一致的不同批次原料血浆醇沉过程中采集样品并离心处理；

（2）采用近红外光谱分析仪采集样品的原始近红外光谱，并按照常规方法测定样品中IgG的实际含量；

（3）将步骤（2）中所得近红外光谱数据与IgG实际含量数据相关联，采用数学方法划分样品集为校正集与验证集，利用化学计量学软件建立校正集样品IgG含量的定量模型；

（4）所有光谱经过一阶导数+SG9点平滑处理之后建立模型，并比较不同变量选择方法对建模结果的影响；

（5）采用验证集样品对上述建立的数学模型的预测能力进行验证。

所述步骤（1）中，间隔时间优选为10min。

所述步骤（1）中，每一批次的醇沉时间为80min，取醇沉条件一致的7个批次，共采集得到63个样品，每个样品的量为1mL，4℃离心处理所有样品。

所述步骤（1）中，原料血浆为人血浆。

所述步骤（2）中，常规方法是指免疫比浊法或免疫扩散法或紫外分光光度法。

优选的，样品中IgG实际含量的测定方法参照药典选择紫外分光光度法。

所述步骤（2）中近红外光谱仪为AntarisⅡ傅里叶变换近红外光谱仪，扫描范围为10000-4000cm^-1，分辨率为8cm^-1，扫描次数32次，每小时采集一次背景。

所述步骤（3）中，所采用数学方法为K-S分类方法，划分为42个校正集与21个验证集，所采用化学计量学软件为TQ Analyst及MATLAB R2010a化学计量学软件。

所述步骤（4）的具体方法为：

光谱经过一阶导数+SG9点平滑后在全光谱范围区间，即10000-4000cm^-1内考察不同的变量选择方法对模型性能的影响，采用留一法交互验证法确定模型的最佳主因子数，以校正集相关系数R_c、交互验证均方根误差（RMSECV）、验证集相关系数R_p、预测均方根误差（RMSEP）为评价指标，以相关系数法、连续投影算法（SPA）、间隔偏最小二乘法（iPLS）选择最佳光谱区间，最终选择最佳光谱区间为10000-7600cm^-1。