[发明专利]一种高效疏水介质的制备方法及其在纯化蛇毒降纤酶中的应用

权利要求书

1.一种高效疏水介质的制备方法，其特征在于方法步骤为：

1）利用分散聚合法制备聚甲基丙烯酸环氧丙酯微球：

各原料组分为：甲基丙烯酸环氧丙酯50-100 g、偶氮二异丁腈或过氧化苯甲酰1-2 g、聚乙烯吡咯烷酮5-20 g、乙醇600-800 ml、甲苯70-200 ml；

制备过程如下：将称量好的原料加入到适当的玻璃反应瓶中,使其充分溶解并通氮气除氧，然后置反应瓶于带有旋转和加热装置的设备上,于65-75摄氏度下聚合24-36h，反应结束后,用沉降方法除去溶剂,并用乙醇充分洗涤,即可得到颗粒分布基本呈现单分散的聚甲基丙烯酸环氧丙酯微球；

2）以聚甲基丙烯酸环氧丙酯微球为基质，通过化学反应接入疏水配基制备高效疏水介质：

在催化剂三氟化硼乙醚的作用下，聚甲基丙烯酸环氧丙酯微球与醇、酚反应，得到高效疏水介质，催化剂的加入量为0.01-0.03ml/g﹒PGMA，反应时间为30-50min，反应温度控制在45-50℃。

2.根据权利要求1所述的一种高效疏水介质的制备方法，其特征是：步骤1）中所述聚甲基丙烯酸环氧丙酯微球的粒径为8-10微米。

3.一种权利要求1所述高效疏水介质在纯化蛇毒降纤酶中的应用，其特征是：将权利要求1合成所得高效疏水介质以20MPa压力装填于不锈钢色谱柱中，然后将柱子连接于制备液相色谱系统，色谱柱平衡液为：20-50mmol/L磷酸盐、PH值为7-8.5、内含1-2mol/L硫酸铵；洗脱液为20-50mmol/L磷酸盐缓冲液、PH值为7-8.5；首先以平衡液将色谱柱平衡至基线平直，然后将降纤酶样品加入柱中， 接着以平衡液洗涤至基线平直；最后以平衡液为A相、洗脱液为B相进行梯度洗脱，得到高纯度降纤酶，活性回收大于90%。