[发明专利]一种基于γ-Fe2O3@Au复合纳米粒子间接富集的NMR食源性致病菌快速检测方法

权利要求书

1.一种基于γ-Fe₂O₃Au复合纳米粒子间接富集的NMR食源性致病菌快速检测方法， 其特征步骤如下：

1）将检测目标菌与目标菌的1抗结合形成1抗复合物；

2）检测目标菌的1抗抗体，即2抗特异性免疫磁珠的制备；

3）将目标菌1抗特异性单克隆抗体在固相载体上的固定；

4）免疫磁珠富集目标菌株，并分离：将第2步制得的2抗免疫磁珠加入到第1步结合了1抗的待检样品，充分混合震荡，抓取目标菌后通过施加外加磁场，则磁珠就汇集到磁场一边，吸走上清液则可以分离出磁珠，若待检样本中有目标菌，目标菌首先与1抗结合形成复合物，在加入2抗磁珠后，通过2抗与1抗的相互作用，从而捕获1抗复合物，被磁珠所富集，加少量无菌的去离子水则形成目标菌的磁珠悬浊液；

4）将富集的磁珠悬浊液加到第3步固定了1抗的单克隆抗体的固相载体上，若存在目标菌则形成双抗夹心，用无菌的去离子水清洗，则没有抓取到目标菌的磁珠就被洗掉，若不存在目标菌，则所有磁珠都被洗掉；

5）之后，用洗脱剂将固定板上的双抗夹心的磁珠洗下来，用外加磁场分离磁珠的方法，用无菌的去离子水清洗掉离子和溶剂，如果还存在磁珠就是抓到目标菌的磁珠；

6）这部分磁珠，加入无菌的去离子水形成磁珠的悬浊液，进行核磁共振的弛豫时间测定，在固定场强下，无菌的去离子水的T1/T2是一个恒定值，以无菌的去离子水为空白，测得的悬浊液的弛豫时间T1/T2相比无菌的去离子水有显著降低，则说明含有磁珠，从而间接证明样本中有目标致病菌，磁珠的量与T1/T2的下降呈正比，可以通过加标定量磁珠而间接定量出目标菌的量。

2.根据权利要求1所述的基于γ-Fe₂O₃Au复合纳米粒子间接富集的NMR食源性致病菌快速检测方法，其特征是所述NMR纳米探针为γ-Fe₂O₃Au复合纳米粒子，即以金为壳层材料的磁性核壳复合纳米粒子材料，纳米粒径小于1000纳米。

3.根据权利要求1所述的基于γ-Fe₂O₃Au复合纳米粒子间接富集的NMR食源性致病菌快速检测方法，其特征是所述的目标菌的最终检出评价方法基于核磁共振技术的弛豫时间的变化。

4.根据权利要求1所述的基于γ-Fe₂O₃Au复合纳米粒子间接富集的NMR食源性致病菌快速检测方法，其特征是所述NMR弛豫时间特性，是指自旋-晶格弛豫时间(T1)和自旋-自旋弛豫时间(T2)。

5.根据权利要求1所述的基于γ-Fe₂O₃Au复合纳米粒子间接富集的NMR食源性致病菌快速检测方法，其特征是所述弛豫时间特性，T1采用180°-τ-90°脉冲方法测定，T2采用CPMG序列方法测定。

6.根据权利要求1所述的基于γ-Fe₂O₃Au复合纳米粒子间接富集的NMR食源性致病菌快速检测方法，其特征是目标菌先与1抗结合形成复合物，用2抗特异性免疫磁珠富集、分离，1抗起信号放大作用。

7.根据权利要求1所述的基于γ-Fe₂O₃Au复合纳米粒子间接富集的NMR食源性致病菌快速检测方法，其特征是1抗指目标菌单克隆抗体，2抗指第1抗体的抗体，可以是单克隆也可以是多克隆抗体。