[发明专利]一种表皮干细胞活性成分及含有该活性成分的美容制剂

权利要求书

1.一种表皮干细胞活性成分，所述活性成分由表皮干细胞分泌，存在于培养表皮干细胞所产生的上清中，并以β-1⁺的形式表达β-1。

2.权利要求1表皮干细胞活性成分的获取方法，是将表皮组织以PBS清洗，剪成1mm×1mm×1mm大小，按照组织与酶液的体积比为1:3，加入溶解在含有双抗的DMEM中的浓度2.5mg/ml的dispase II酶液中，将酶液置于4℃冰箱过夜；用200目过滤网过滤细胞，收集滤液，用等量的含10wt%FBS的DMEM中和酶的活性；剩余组织块以0.25wt%胰酶/EDTA在37℃消化，用200目过滤网过滤细胞，收集滤液；合并两次滤液，应用磁珠标记的抗β-1抗体，即CD29抗体，以磁珠筛选法筛选出β-1⁺细胞。

3.权利要求2获得的表皮干细胞活性成分的培养方法，包括：

1)、将分选出的表皮干细胞接种于生长有NIH3T3细胞的培养瓶上，加入5ml表皮干细胞专用培养基，在湿度≥95%，温度37℃，CO₂体积浓度5%环境下培养，隔2天换液；

2)、待细胞80%融合后，先用0.02wt%EDTA去除NIH3T3细胞，再以0.25wt%胰酶和0.02wt%EDTA消化传代，将传代产生的细胞移入新的培养瓶中；

3)、重复以上培养、扩增过程，培养过程中可根据需要调整最佳的细胞数量；

其中，所述的表皮干细胞专用培养基是由DMEM:HAM F-12=3:1的体积比混合，并含有10wt%FBS 20ng/ml、EGF 5ug/ml、转铁蛋白1.8×10^-4mol/l、腺嘌呤1.8×10^-4 mol/l、胰岛素5ug/ml和氢化可的松0.4ug/ml，pH＝7.0～7.4。

4.一种包含有权利要求1表皮干细胞活性成分的的霜剂化妆品，由以下重量份数的组分为原料制备得到：羊毛醇3～5、白蜂蜡1～3、鲸蜡5～10、硼砂0.3～0.5、去离子水20～50、表皮干细胞活性成分10～15、DMDM/F12培养基20～55、成纤维细胞生长因子0.02～0.08、表皮细胞生长因子0.05～0.08、SOD3～5。