[发明专利]产纤维素酶的突变菌株、高效表达目的蛋白的突变菌株及其构建方法与应用

权利要求书

1.用于生产纤维素酶的双基因突变菌株，其特征在于，能够在纤维二糖诱导条件下表达含纤维二糖水解酶CBH1和CBH2在内的纤维素酶系；为以下菌株之一：

a.命名为BG13(NCU00130×NCU08755)的双基因突变菌株，是敲除β-葡萄糖苷酶基因NCU00130和NCU08755的微生物菌株；

b.命名为BG12(NCU00130×NCU04952)，是敲除β-葡萄糖苷酶基因NCU00130和NCU04952的微生物菌株；

c.命名为BG23(NCU04952×NCU08755)，是敲除β-葡萄糖苷酶基因NCU04952和NCU08755的微生物菌株；

所述微生物包括但不限于脉孢菌属（Neurospora）、曲霉属（Aspergillus）、木霉属（Trichoderma）、青霉属（Penicillium）、镰刀霉属（Fusarium）、腐质霉属（humicola）、孢壳霉属（Thielavia）或侧孢霉属（Sporotrichum）；

所述β-葡萄糖苷酶基因的核苷酸序列及其编码蛋白的氨基酸残基序列如下：

1）β-葡萄糖苷酶基因NCU00130的核苷酸序列如序列表中SEQ ID NO.1所示；β-葡萄糖苷酶基因NCU00130编码蛋白的氨基酸残基序列如序列表中SEQ ID NO.2所示；

2）β-葡萄糖苷酶基因NCU04952的核苷酸序列如序列表中SEQ ID NO.3所示；β-葡萄糖苷酶基因NCU04952编码蛋白的氨基酸残基序列如序列表中SEQ ID NO.4所示；

3）β-葡萄糖苷酶基因NCU08755的核苷酸序列如序列表中SEQ ID NO.5所示；β-葡萄糖苷酶基因NCU08755编码蛋白的氨基酸残基序列如序列表中SEQ ID NO.6所示。

2.根据权利要求1所述的双基因突变菌株，其特征在于：以粗糙脉孢菌（Neurospora crassa）为出发菌株构建的双基因(NCU00130×NCU08755)BG13突变株的保藏编号为CGMCC No.7263。

3.权利要求1或2所述的双基因突变菌株的构建方法，其特征在于：包括敲除微生物中三个β-葡萄糖苷酶基因NCU00130、NCU04952和NCU08755中任意两个的过程；该过程可以是用对应其中两个基因的β-葡萄糖苷酶单突变体菌株进行杂交。

4.用于生产纤维素酶的三基因突变菌株，命名为BG123(NCU00130×NCU04952×NCU08755)，其特征在于，能够在纤维二糖诱导条件下表达含纤维二糖水解酶CBH1和CBH2在内的纤维素酶系；是敲除β-葡萄糖苷酶基因NCU00130、NCU04952和NCU08755的微生物菌株，所述微生物包括但不限于为脉孢菌属（Neurospora）、曲霉属（Aspergillus）、木霉属（Trichoderma）、青霉属（Penicillium）、镰刀霉属（Fusarium）、腐质霉属（humicola）、孢壳霉属（Thielavia）或侧孢霉属（Sporotrichum）；

所述β-葡萄糖苷酶基因NCU00130、NCU04952和NCU08755的核苷酸序列及其编码蛋白的氨基酸残基序列如下：

1）β-葡萄糖苷酶基因NCU00130的核苷酸序列如序列表中SEQ ID NO.1所示；

2)β-葡萄糖苷酶基因NCU00130编码蛋白的氨基酸残基序列如序列表中SEQ ID NO.2所示；

3）β-葡萄糖苷酶基因NCU04952的核苷酸序列如序列表中SEQ ID NO.3所示；

4)β-葡萄糖苷酶基因NCU04952编码蛋白的氨基酸残基序列如序列表中SEQ ID NO.4所示；

5）β-葡萄糖苷酶基因NCU08755的核苷酸序列如序列表中SEQ ID NO.5所示；

6)β-葡萄糖苷酶基因NCU08755编码蛋白的氨基酸残基序列如序列表中SEQ ID NO.6所示。

5.根据权利要求4所述的三基因突变菌株，其特征在于：以粗糙脉孢菌（Neurospora crassa）为出发菌株构建的三基因(NCU00130×NCU04952×NCU08755)BG123突变株的保藏编号为CGMCC No.7264。