[发明专利]一种山药苗离体繁殖方法

说明书

技术领域

本发明属于植物组织培养技术领域，更具体涉及一种山药苗的快速繁殖方法，是利用基本培养基和附加不同成份对利川山药苗的快速繁殖方法。

背景技术

湖北利川山药，在利川市有1500多年的种植历史，它富含硒、锗等稀有微量元素，性平味甘、无副作用，是医疗上一种常用中药，也是人们喜食的一种上乘滋补蔬菜和天然保健品。2007年，利川山药成为国家质检总局地理标志保护产品；2008年，利川山药产地被国家绿色食品中心认定为“全国绿色食品原料标准化生产基地”；2009年，利川山药获国家绿色食品认证；同年，在农业部信息中心举办的首届中国农产品区域公用品牌建设论坛上，“利川山药”的品牌价值为2.32亿元；2010年，“龙船水乡”牌利川山药获国家有机转换食品认证；同年，“龙船水乡”牌利川山药被选定为上海世博会专供产品，在国际有机食品博览会成功签约160万美元。利川山药作为高产高效经济作物被广泛种植。

利川山药一般采用无性繁殖技术，此技术虽然简单易行，但大都是以根茎作为种源，这在一定程度上减少了产量，且长期营养繁殖，致使其品质退化，农药残留严重，产量降低。为保证该物种遗传物质的稳定性，只有通过植物组织培养技术，采用植物营养体进行快速繁殖，才可保持原品种全部的遗传性，实现该品种种质的一致性。

发明内容

本发明的目的是在于提供了一种山药苗离体繁殖方法，方法易行，操作方便，繁殖速度快，可加快利川或其它地方山药快速繁殖。

为了达到上述目的，本发明采用以下技术措施：

一种山药苗离体繁殖方法，其步骤是：

A、取利川山药刚长出的10～15cm左右地上茎为外植体，剪成2～4cm左右带茎节的节段，先用洗衣粉水摇晃浸泡4～6min，再用自来水冲洗干净，在超净工作台上用75%（体积比）的酒精溶液浸泡10～30s，无菌水冲洗，再用0.1%（重量比）升汞溶液消毒3～7min，无菌水冲3～5次；

B、无菌纸吸干外植体表面水分。用灭菌的手术刀将茎切成0.9～1.1cm的带节茎段。按极性方向竖插于配制好的培养基中。诱导培养基的有效成份为：MS+KT1.5～2.5mg/L+NAA0.1～0.2mg/L+琼脂4000～6000mg/L+白糖20000～30000mg/L+PVP100～200mg/L；

C、光照培养，温度为25～28℃，光强1500～3000Lx，每天光照10～16h，培养30～60d，长出丛芽；

D、然后将丛芽切割成数个小丛芽转入B步骤中的诱导培养基中进行芽的继代增殖培养，以后每隔25～35d继代1次。继代培养过程中将已有3～4片展开叶，苗高4～5cm的健壮小苗转生根培养基中，使其形成完整植株。生根培养基的有效成份为：1/2MS+BA0.1～0.3mg/L+NAA0.4～0.6mg/L+琼脂4000～6000mg/L+白糖30000～60000mg/L+活性炭0.1%～0.3%；

E、山药试管苗接种于生根培养基中30～40d，待叶片4～5片，长2条以上根时即开瓶炼苗5～7d，将瓶内苗轻轻取出，用0.003%～0.005%（重量比）NAA溶液浸苗根基部10～15min，将组培苗移栽到基质（草炭∶珍珠岩∶蛭石=2∶1∶1)）中，浇足定根水，盖上小拱棚膜保温保湿，前期温度保持在15～25℃，湿度80～90%以上，7～15d后逐步揭膜降低温度，增加光照强度，每隔2～3周浇施0.1%～0.3%（重量比）尿素和0.1%～0.3%（重量比）KH₂PO₄或稀薄粪水，保证棚内生长期肥水管理条件相一致，注意进行病虫害防治，组培苗成活率达95%以上，将成活苗移栽。

所述的MS培养基的成份(单位：mg/L)：

硝酸氨                    1650

硝酸钾                    1900

七水硫酸镁                370

磷酸二氢钾                170

二水氯化钙                440

乙二胺四乙酸二钠          37.3

碘化钾                    0.83

硼酸                      6.2

四水硫酸锰                22.3

七水硫酸锌                8.6

二水钼酸钠                0.25