[发明专利]培育高含硫氨基酸的转基因苜蓿的方法及其专用材料

权利要求书

1.培育氨基酸含量改变的转基因苜蓿的方法，包括向受体苜蓿中导入天冬氨酸激酶编码基因和腺苷硫酸还原酶编码基因，得到氨基酸含量改变的转基因苜蓿；

所述转基因苜蓿具有下述1）-4）中的全部特性或至少一种特性：

1）所述转基因苜蓿与所述受体苜蓿相比，甲硫氨酸含量提高；

2）所述转基因苜蓿与所述受体苜蓿相比，半胱氨酸含量提高；

3）所述转基因苜蓿与所述受体苜蓿相比，天冬氨酸含量提高；

4）所述转基因苜蓿与所述受体苜蓿相比，赖氨酸含量提高；

所述天冬氨酸激酶是如下a）或b）的蛋白质：

a）氨基酸序列如SEQ ID No.2第65-512位所示的蛋白质；

b）将SEQ ID No.2第65-512位经过取代和/或缺失和/或添加一个或几个氨基酸残基得到的具有天冬氨酸激酶活性的由a）衍生的蛋白质；

所述腺苷硫酸还原酶是如下c）或d）的蛋白质：

c）氨基酸序列如SEQ ID No.4第65-330位所示的蛋白质；

d）将SEQ ID No.4第65-330位经过取代和/或缺失和/或添加一个或几个氨基酸残基得到的具有腺苷硫酸还原酶活性的由c）衍生的蛋白质。

2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于：所述天冬氨酸激酶编码基因为如下1）或2）或3）或4）所示的基因，和/或所述腺苷硫酸还原酶为如下5）或6）或7）或8）所示的基因：

1）编码所述天冬氨酸激酶的DNA分子；

2）其编码序列是SEQ ID No.1的第1196-2542位核苷酸的DNA分子；

3）在严格条件下与1）限定的DNA分子杂交且编码所述天冬氨酸激酶的DNA分子；

4）与1）限定的DNA分子具有90％以上的同源性且编码所述天冬氨酸激酶的DNA分子；

5）编码所述腺苷硫酸还原酶的DNA分子；

6）其编码序列是SEQ ID No.3的第1196-1996位核苷酸的DNA分子；

7）在严格条件下与1）限定的DNA分子杂交且编码所述腺苷硫酸还原酶的DNA分子；

8）与1）限定的DNA分子具有90％以上的同源性且编码所述腺苷硫酸还原酶的DNA分子。

3.根据权利要求1或2所述的方法，其特征在于：所述天冬氨酸激酶编码基因和腺苷硫酸还原酶编码基因通过天冬氨酸激酶编码基因和腺苷硫酸还原酶编码基因表达载体导入所述受体苜蓿；所述天冬氨酸激酶编码基因和腺苷硫酸还原酶编码基因表达载体含有天冬氨酸激酶编码基因表达盒和腺苷硫酸还原酶编码基因表达盒；所述天冬氨酸激酶编码基因表达盒包括启动子1和由所述启动子1启动的叶绿体引导肽天冬氨酸激酶融合蛋白基因和终止所述叶绿体引导肽天冬氨酸激酶融合蛋白基因转录的终止子1；所述叶绿体引导肽天冬氨酸激酶融合蛋白基因是所述天冬氨酸激酶编码基因与所述叶绿体引导肽基因相连接形成的融合基因，所述叶绿体引导肽基因位于所述天冬氨酸激酶编码基因的上游；

所述腺苷硫酸还原酶编码基因表达盒包括启动子2和由所述启动子2启动的叶绿体引导肽腺苷硫酸还原酶融合基因和终止所述叶绿体引导肽腺苷硫酸还原酶融合蛋白基因转录的终止子2；所述叶绿体引导肽腺苷硫酸还原酶融合蛋白基因是所述腺苷硫酸还原酶编码基因与所述叶绿体引导肽基因相连接形成的融合基因，所述叶绿体引导肽基因位于所述腺苷硫酸还原酶编码基因的上游。

4.根据权利要求3所述的方法，其特征在于：所述叶绿体引导肽腺苷硫酸还原酶融合蛋白的氨基酸序列如SEQ ID No.2所示，所述叶绿体引导肽腺苷硫酸还原酶融合蛋白的氨基酸序列如SEQ ID No.4所示。

5.根据权利要求3或4所述的方法，其特征在于：所述叶绿体引导肽天冬氨酸激酶融合基因序列如SEQ ID No.1的第1004-2542位所示；所述叶绿体引导肽腺苷硫酸还原酶融合基因序列如SEQ ID No.3的第1004-1996位所示；所述启动子1和启动子2均是35s，所述终止子1和所述终止子2均是ocs。

6.根据权利要求3-5中任一所述的方法，其特征在于：所述天冬氨酸激酶编码基因表达盒的核苷酸序列如SEQ ID No.1所示；腺苷硫酸还原酶编码基因表达盒的核苷酸序列如SEQ ID No.3所示。