[发明专利]一类突变的具有高耐碱特性的蛋白A及其应用

说明书

本发明属于蛋白工程领域，涉及一类突变的具有高耐碱特性的蛋白A及其应用。本发明蛋白A能牢固结合到免疫球蛋白分子除互补决定区之外其他区域，可以作为偶联于固相载体的配体用于分离免疫球蛋白。这类蛋白A能在PH13‐14强碱环境中保持化学稳定性，作为层析配体从而可以耐受苛刻的原位清洗条件。本发明也涉及使用蛋白Ａ配体分离纯化免疫球蛋白和用碱再生的过程。

技术领域

本发明属于蛋白工程领域，涉及一类突变的具有高耐碱特性的蛋白A及其应用。

背景技术

生物技术是当今世界高技术发展最快的领域之一。作为生物技术领域之一的抗体药物，近些年，在不断地提高患者健康水平和生活质量的同时，也取得了瞩目的市场业绩。另外，新药研发不断增加投入的同时，创新药物却在明显减少，且目前众多小分子药物还面临着专利悬崖的威胁。所以，为了寻求新的增长点，众多制药企业尤其是生物技术制药公司，逐渐进入抗体药物研发领域。目前，抗体药物在基础生物医学研究、疾病(如癌症、器官移植排斥、自身免疫性疾病等)的诊断和治疗方面已经被广泛应用。

近年来随着治疗性药用抗体药物在医疗领域大量出现，其生产工艺也开始受到人们的重视。对于用于药物和诊断试剂的抗体药物的大规模经济生产，一般而言，是通过细胞培养在细胞内或通过分泌进入周围的培养基中生产目标抗体。由于培养细胞的过程需要在培养基中加入糖，氨基酸，生长因子，因此必须将抗体从培养基和其他细胞组分中分离达到足够的纯度，才可以用作人治疗剂。现在最普遍采用的抗体纯化方式是亲和层析，其优势在于简单快速选择性强，早期先进行亲和纯化，可以明显减少后续纯化的步骤。在现代工业中保持低的生产成本也是生产工艺中很重要的要求，如果生产中所需的纯化层析介质可以反复使用，可以明显降低抗体的生产成本。但是，由于层析介质每次纯化抗体都会留下未洗脱的蛋白，蛋白聚集体甚至残留对人体有害的物质，例如病毒，内毒素。所以介质在重新使用时必须进行清洁，现在最有效的恢复层析介质的清洁方式是被称作原位清洁的碱性方法，其标准流程包括用0.5M NaOH处理纯化介质，这种苛刻的方式可以有效地去除杂质，但是很可能损害纯化介质。因此本发明涉及的耐碱的并可以结合免疫球蛋白的蛋白Ａ分子可以作为亲和介质上很好的配体，用于纯化抗体药物，其纯化介质也可以用原位清洁的碱性方法对使用后的纯化介质进行再生。

发明内容

本发明的目的是针对现有技术的上述不足，提供一类突变的具有高耐碱特性的蛋白A。

本发明的另一目的是提供该蛋白A的应用。

本发明的目的可通过如下技术方案实现：

一类基因突变的蛋白Ａ，其氨基酸序列如SEQ ID NO.1或SEQ ID NO.2所示，或者与SEQ ID NO.1或SEQ ID NO.2所示的氨基酸序列在与免疫球蛋白结合区域有99%以上同源性的能够结合免疫球蛋白的所有氨基酸序列，其中，所述的与免疫球蛋白结合区域为第7～第54个氨基酸残基。

编码所述的蛋白Ａ的核酸。