[发明专利]一种产朊假丝酵母蛋白制剂及其在养殖中的应用

说明书

技术领域

本发明涉及微生物发酵工程领域，具体地说是一种固体培养基经产朊假丝酵母工程菌发酵制备产朊假丝酵母蛋白饲料的方法及其在养殖业中的应用。 

背景技术

产朊假丝酵母（Candida utilis）又叫产朊圆酵母或食用圆酵母，假丝酵母属产朊假丝酵母种，细胞呈圆形、椭圆形和圆柱形，大小为3.5～4.5μm× 7～13μm。液体培养无扑醭，产生菌体沉淀和环状薄浮膜，能发酵。麦芽汁培养基上的菌落为乳白色，平滑，有光泽或无光泽，边缘整齐或呈菌丝状。在加盖片的玉米粉琼脂培养基上，仅能生成一些原始的假菌丝或不发达的假菌丝，或无菌丝。适宜生长温度为25～28℃。其对动物生产的作用是：能提供动物所需的部分营养物质，并且能够调节动物肠道微生态平衡，提高饲料消化率，增强动物机体免疫力。其蛋白质和维生素B的含量都比啤酒酵母高，它能以尿素和硝酸作为氮源，在培养基不需要加入任何生长因子即可生长。它能利用五碳糖和六碳糖，既能利用造纸工业的亚硫酸废液，还能利用糖蜜、木材水解液等生产出可食用的蛋白质。 

     产朊假丝酵母（Candida utilis）富含蛋白质、糖类和B族维生素，蛋白质含量占细胞干物质的45~55%，并且脂肪含量低，还含有多种酶类、谷胱甘肽和其它无机盐等，且发酵周期短，发酵工艺成熟。产朊假丝酵母作为一种GRAS（美国食品药物主管机构给予的检验标记）安全生物，被美国FDA（食品及药物管理局）认证为可作为食品添加剂的酵母，并能运用于食品和制药行业，用于食用蛋白和谷胱甘肽等产品的生产。德国、美国等一些国家和地区广泛地将产朊假丝酵母用于饲料行业，作为优良的饲用蛋白质；或者用于秸秆、菜籽饼等材料的发酵，用于饲用蛋白的生产或脱毒。产朊假丝酵母具有较强的转化无机氮为有机氮的能力，并且在其发酵过程中会产生大量的生物活性物质。因此，利用产朊假丝酵母生产饲用添加剂或发酵剂具有良好的应用前景。 

发明内容

本发明的目的在于提供一种产朊假丝酵母蛋白饲料发酵生产方法。    

本发明的另一个目的在于提供该产朊假丝酵母蛋白饲料作为添加剂在养殖业的应用。

本发明是使用广东省微生物研究所菌种保藏中心的产朊假丝酵母菌作为发酵菌种，菌种保藏编号GIM2.148。通过对产朊假丝酵母蛋白饲料进行培养基配方的研究，通过单因子试验，确定为以玉米粉和小麦粉为基础料（质量比为3:1），添加2%葡萄糖，最适无机盐和生长因子分别为0.5% K2HPO4和0.05%生物素；在此基础上对葡萄糖、K2HPO4及生物素进行了3因素3水平正交试验，筛选出优化培养基为：以玉米粉和小麦粉为基础料（质量比为3:1），葡萄糖2%，K2HPO4  1.0%，生物素0.01%。 

以玉米粉和小麦粉作为基础料，添加适量的碳源、氮源、无机盐和生长因子进行产朊假丝酵母固体发酵，降低培养基成本，提高产朊假丝酵母菌密度，为其在养殖业中的应用提供基础。经此方法发酵生产的产朊假丝酵母蛋白饲料含有丰富的蛋白质、B族维生素、氨基酸等物质，广泛用作动物饲料的蛋白质补充物。它能促进动物的生长发育，缩短饲养期，增加肉量和蛋量，改良肉质和提高瘦肉率，改善皮毛的光泽度，并能增强幼畜禽的抗病能力。 

  

具体实施方式

实施例1  固体发酵生产产朊假丝酵母蛋白饲料的工艺流程

   1. 菌种活化：

本发明采用产朊假丝酵母（Candida utilis）作为发酵菌种，购于广东省微生物研究所菌种保藏中心，菌种保藏编号GIM2.148，将-80℃保存的产朊假丝酵母菌种在 YPD固体（蛋白胨 10g，酵母提取物 5g，葡萄糖10g，琼脂粉15g，加水至1升，高温高压灭菌备用）斜面上划线，28℃培养16~24小时；它和啤酒酵母、克鲁维酵母被美国FDA认证为作为食品添加剂的酵母，能运用于食品、制药和饲料业，包括肉制品工业。在许多国家如德国、美国以及巴西，产朊假丝酵母都被用作于牲畜的饲料。

    2. 制备一级种子： 

    将活化的产朊假丝酵母菌种，用接种环挑取一环接种于200 mL YPD液体（蛋白胨 10g，酵母提取物 5g，葡萄糖10g，加水至1升，高温高压灭菌备用）培养基中，将三角瓶置于摇床中，28℃，250rpm，振荡培养20小时后，制得一级种子液。

3. 配制固体发酵培养基：