[发明专利]一种提取苹果属植物树皮组织全蛋白的方法

说明书

技术领域

本发明涉及植物生物化学领域，特别涉及了一种提取苹果属植物树皮组织全蛋白的方法。

背景技术

苹果作为世界主栽果树之一已有几千年的栽培历史；随着苹果分子生物学研究的不断深入和发展，分子生物学手段也为苹果遗传研究提供便利条件；早在1989年，欧洲苹果基因组计划开始启动，并以苹果遗传学研究作为其长期工作重点；近年来，具备高通量、高灵敏性等优点的蛋白质组学研究，已成为生命科学研究的前沿和热门领域；目前，随着果树基因组研究工作的不断深入和完善，蛋白质组学分析技术已经应用于苹果、梨、葡萄、桃、香蕉等果树品种研究上。2010年公布了苹果栽培品种“金冠”的全基因组草图，其测序结果所产生的海量数据，为应用蛋白质组学相关技术，开展以苹果属植物为材料的相关研究提供了理论依据和参考。

蛋白质的提取是双向电泳的关键和基础；与苹果其他器官相比，树皮组织中含有大量的酚、酮、单宁等次生代谢物质，使其蛋白质的提取更为复杂。

发明内容

本发明的目的是为了提高样品的得率，有效去除多酚和色素等杂质，特提供了一种提取苹果属植物树皮组织全蛋白的方法。

本发明提供了一种提取苹果属植物树皮组织全蛋白的方法，其特征在于：所述的提取苹果属植物树皮组织全蛋白的方法，具体为：

选择待采集样品的枝条，无菌水清洗表面后快速风干，用锋利的小刀刮下采集部位的树皮周皮，然后将树皮分割为若干小块，面积为0.5-1.5cm²；

准确称取2g树皮样品，置于研钵中，加入0.5克石英砂，0.2克聚乙烯聚吡咯烷酮，然后加液氮研磨树皮样品10-20分钟，至精细粉末状，粒径为0.08-0.12毫米，将粉末样品盛装于离心管；

样品悬浮于4毫升pH8.0的饱和酚和4毫升的样品提取液中，4℃下涡旋振荡30分钟；

匀浆液在4℃下，15000×g，离心15分钟，收集上层酚相；

将收集的酚相中加入5倍体积0.1M甲醇醋酸铵溶液，-20℃下沉淀5h以上；

沉淀后的溶液在4℃下，15000×g，离心10分钟，沉淀物经含20mM二硫苏糖醇的冷丙酮，漂洗三次，室温下风干，得到蛋白干粉，-80℃条件下保存备用。

所述的样品提取液为：20mM的三羟甲基氨基甲烷盐酸盐缓冲液（pH7.5）；300mM蔗糖；10mM乙二醇-双(2-氨基乙醚)四乙酸；1mM苯甲基磺酰氟；5%的β-巯基乙醇和1%聚乙二醇辛基苯基醚X-100。

本发明的优点：

本发明所述的提取苹果属植物树皮组织全蛋白的方法，适于苹果枝条表皮蛋白质提取，采用改进的Tris-饱和酚沉淀法提取植物树皮组织中的全蛋白，不仅可以提高样品的得率，还可以有效去除多酚和色素等杂质。本发明可以为与苹果属植物树皮有关的研究提供高质量的蛋白质样品，为进一步开展苹果蛋白质组学研究奠定基础。

具体实施方式

实施例1

本实施例提供了一种提取苹果属植物树皮组织全蛋白的方法，其特征在于：所述的提取苹果属植物树皮组织全蛋白的方法，具体为：

选择待采集样品的枝条，无菌水清洗表面后快速风干，用锋利的小刀刮下采集部位的树皮周皮，然后将树皮分割为若干小块，面积为0.5cm²；

准确称取2g树皮样品，置于研钵中，加入0.5克石英砂，0.2克聚乙烯聚吡咯烷酮，然后加液氮研磨树皮样品10分钟，至精细粉末状，粒径为0.08-0.12毫米，将粉末样品盛装于离心管；

样品悬浮于4毫升pH8.0的饱和酚和4毫升的样品提取液中，4℃下涡旋振荡30分钟；

匀浆液在4℃下，15000×g，离心15分钟，收集上层酚相；

将收集的酚相中加入5倍体积0.1M甲醇醋酸铵溶液，-20℃下沉淀5h以上；

沉淀后的溶液在4℃下，15000×g，离心10分钟，沉淀物经含20mM二硫苏糖醇的冷丙酮，漂洗三次，室温下风干，得到蛋白干粉，-80℃条件下保存备用。

所述的样品提取液为：20mM的三羟甲基氨基甲烷盐酸盐缓冲液（pH7.5）；300mM蔗糖；10mM乙二醇-双(2-氨基乙醚)四乙酸；1mM苯甲基磺酰氟；5%的β-巯基乙醇和1%聚乙二醇辛基苯基醚X-100。

实施例2

本实施例提供了一种提取苹果属植物树皮组织全蛋白的方法，其特征在于：所述的提取苹果属植物树皮组织全蛋白的方法，具体为：