[发明专利]一种苹果属植物叶片全蛋白提取方法无效
| 申请号： | 201310089139.3 | 申请日： | 2013-03-19 |
| 公开（公告）号： | CN103275170A | 公开（公告）日： | 2013-09-04 |
| 发明（设计）人： | 张彩霞;丛佩华;张利义;康国栋;田义;王强;杨玲 | 申请（专利权）人： | 中国农业科学院果树研究所 |
| 主分类号： | C07K1/14 | 分类号： | C07K1/14 |
| 代理公司： | 沈阳晨创科技专利代理有限责任公司 21001 | 代理人： | 任玉龙 |
| 地址： | 125100 辽宁*** | 国省代码： | 辽宁;21 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 一种 苹果 植物 叶片 蛋白 提取 方法 | ||
【权利要求书】：
1.一种苹果属植物叶片全蛋白提取方法，其特征在于：所述的苹果属植物叶片全蛋白提取方法，具体为：
采摘叶龄为20～25天的幼嫩叶片，无菌水清洗后快速风干，用锋利刀片去除叶片叶柄部分，准确称取2克，用液氮在研钵中迅速研磨成精细粉末，粒径约为40-60微米，研磨时间3分钟；
加入4ml的匀浆缓冲液，4℃下涡旋振荡10分钟；
匀浆液中加入等体积的Tris-饱和酚，具体为三羟甲基氨基甲烷缓冲液配制的pH 8.0的苯酚溶液，4℃下，涡旋摇荡20分钟；
将匀浆液转入离心管中，4℃下15000×g，离心30分钟，上层酚相转移新离心管；
重新加入同体积的上述匀浆缓冲液,4℃下涡旋震荡10分钟，15000×g离心10分钟；
继续回收酚相，加入5倍体积0.1M甲醇醋酸铵溶液，-20℃条件下沉淀4小时以上；
溶液在4℃下，15 000×g，离心10分钟，沉淀物经冷丙酮（含20mM二硫苏糖醇）漂洗三次，室温风干，得到蛋白干粉，-80℃条件下保存备用。
2.按照权利要求1所述的苹果属植物叶片全蛋白提取方法，其特征在于：所述的匀浆缓冲液中含有20mM三羟甲基氨基甲烷盐酸盐缓冲液（pH 7.5）、250mM蔗糖、10mM乙二醇-双(2-氨基乙醚)四乙酸、1mM苯甲基磺酰氟、1mM二硫苏糖醇、1%聚乙二醇辛基苯基醚X-100、10%聚乙烯聚吡咯烷酮。
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