[发明专利]猪链球菌胞壁水解酶、其编码基因及应用

说明书

技术领域

本发明涉及生物技术领域，具体涉及一种猪链球菌胞壁水解酶、其编码基因和应用。

技术背景

猪链球菌是一种重要的人兽共患病病原，可以引起脑膜炎、关节炎、心内膜炎、败血症、肺炎、休克和突然死亡等。该菌按荚膜多糖抗原差异可分为33个血清型，其中2型(SS2)是流行最广，致病性最强，猪群携带率较高的病原，给养猪业造成巨大经济损失，对公共卫生尤其是从业人员的生命安全亦构成严重威胁。荷兰、英国、美国、加拿大、澳大利亚、新西兰、比利时、巴西、丹麦、挪威、芬兰、西班牙、德国、爱尔兰、日本、中国台湾及大陆等先后报道了该病。

猪链球菌病2型感染后一般采取抗生素治疗，但近年来抗生素的滥用，使猪链球菌2型产生了严重的耐药性，给该病的防控带来困难。

发明内容

本发明的目的是提供一种猪链球菌胞壁水解酶，能够有效杀灭猪链球菌。

本发明的另一目的是提供猪链球菌胞壁水解酶的基因。

本发明的再一目的是提供猪链球菌胞壁水解酶在杀灭猪链球菌方面的应用。

本发明的目的采用如下技术方案实现：

一种猪链球菌胞壁水解酶，其氨基酸序列如SEQ ID NO：1所示。

编码所述猪链球菌胞壁水解酶的基因。所述基因的序列如SEQ ID NO：2所示。可以理解的是，由于氨基酸密码子的简并性，本发明中编码猪链球菌胞壁水解酶的基因除了SEQ ID NO.2所示的序列，还包括编码上述氨基酸序列的其他核酸分子。

含有猪链球菌胞壁水解酶的基因的重组表达载体。所述猪链球菌胞壁水解酶的基因序列可以为SEQ ID NO.2所示。所述重组表达载体是将猪链球菌胞壁水解酶的基因插入pET-32a（＋）的EcoR I和Xho I酶切位点之间。

含有猪链球菌胞壁水解酶的基因的重组菌。所述猪链球菌胞壁水解酶的基因序列可以为SEQ ID NO.2所示。

一种制备猪链球菌胞壁水解酶的方法，通过培养所述重组菌并进行纯化后得到所述猪链球菌胞壁水解酶。

所述猪链球菌胞壁水解酶在杀灭猪链球菌方面的应用。

本发明的有益效果：

本发明提供的猪链球菌胞壁水解酶，能够有效杀灭猪链球菌，大肠杆菌、金黄色葡萄球菌及嗜水气单胞杆菌。

本发明猪链球菌胞壁水解酶的基因可以在重组大肠杆菌中高效表达，所得猪链球菌胞壁水解酶活性和稳定性高，能够有效杀灭猪链球菌，大肠杆菌、金黄色葡萄球菌及嗜水气单胞杆菌。

采用本发明重组菌进行制备猪链球菌胞壁水解酶，方法简单，成本低廉。

附图说明

图1为重组表达蛋白的SDS-PAGE电泳图，其中：1、对照菌的菌体裂解液；2、无IPTG诱导培养的BL21-pET32a-LytA的菌体裂解液；3-6、IPTG诱导培养的BL21-pET32a-LytA的菌体裂解液,诱导时间分别为2h、3h、4h和5h；7、纯化后的重组表达蛋白；M、蛋白分子marker。

图2为验证重组表达蛋白胞壁水解酶活性的酶谱实验图，其中：1、纯化的重组表达蛋白；2、对照菌裂解液；M、蛋白分子marker。

图3为重组表达蛋白的Western-blotting分析电泳图，其中：1、对照菌的菌体裂解液；2、纯化后的重组表达蛋白；M、蛋白分子marker。

图4是重组表达蛋白对猪链球菌2型HA9801株的平板溶菌试验照片，其中纸片1上滴加的是纯化的重组表达蛋白，纸片2上滴加的是经IPTG诱导培养的含空载体pET32a的BL21裂解液，纸片3上滴加的是PBS缓冲液。

图5是重组表达蛋白对猪链球菌2型ZY05719株的平板溶菌试验照片，其中纸片1上滴加的是纯化的重组表达蛋白，纸片2上滴加的是经IPTG诱导培养的含空载体pET32a的BL21裂解液，纸片3上滴加的是PBS缓冲液。

图6是重组表达蛋白对猪链球菌2型T15株的平板溶菌试验照片，其中纸片1上滴加的是纯化的重组表达蛋白，纸片2上滴加的是经IPTG诱导培养的含空载体pET32a的BL21裂解液，纸片3上滴加的是PBS缓冲液。

具体实施方式

下面对本发明的实施例作详细说明，本实施例在以本发明技术方案为前提下进行实施，给出了详细的实施方式和具体的操作过程，未注明具体条件的实验方法、工作原理，通常按照常规条件进行。本发明的保护范围不先于下述的实施例。