[发明专利]以抗生素为碳源生长的土壤微生物的分离方法

权利要求书

1.以抗生素为碳源生长的土壤微生物的分离方法，其特征在于包括以下步骤：

1）、制备单一碳源介质：

溶解5 g (NH₄)₂SO₄, 3 g KH₂PO₄, 0.5 g MgSO₄.7H₂O, 15 mg EDTA, 4.5 mg ZnSO₄.7H₂O, 4.5 mg CaCl₂.2H₂O, 3 mg FeSO₄.7H₂O, 1 mg MnCl₂.4H₂O, 1 mg H₃BO₃, 0.4 mg Na₂MoO₄.2H₂O, 0.3 mg CuSO₄. 5H₂O, 0.3 mg CoCl₂.6H₂O 和 0.1 mg KI至900ml蒸馏水中，用0.1mol/L NaOH溶液调pH至6.2~6.4，再用蒸馏水定容至1000ml；得液态单一碳源介质；

2）、制备液体抗性培养基和固体抗性培养基：

在液态单一碳源介质中加入青霉素直至青霉素的浓度为0.8~1.2g/L，过0.22μm滤膜；得液体抗性培养基；

在500mL的液态单一碳源介质中加入7.5克琼脂后灭菌，冷却至40~50℃后，加入经过0.22μm滤膜的青霉素溶液直至所得的液态物中青霉素的浓度为0.8~1.2g/L；所得的液态物冷却后，得固体抗性培养基；

3）、制备土壤稀释液：

称1g土壤放入盛有49 mL磷酸盐缓冲液的容器中，在摇床上振荡20~40min；得菌悬液；

用液体抗性培养基将菌悬液稀释至菌悬液的体积浓度为0.1%的土壤稀释液；

以上操作在超菌台中完成；

4）、倒置培养：

在超菌台上，将土壤稀释液涂布在固体抗性培养基上；

然后室温静止5~10 min；接着，将固体抗性培养基倒置于恒温培养箱29~31℃下培养，直至固体抗性培养基表面长出菌落，再通过平板划线得到纯培养物，所述纯培养物为土壤细菌。

2.根据权利要求1所述的以抗生素为碳源生长的土壤微生物的分离方法，其特征在于所述步骤2）中：

在液态单一碳源介质中加入青霉素直至青霉素的浓度为1g/L；

所述液态物中青霉素的浓度为1g/L。

3.根据权利要求2所述的以抗生素为碳源生长的土壤微生物的分离方法，其特征在于：将固体抗性培养基倒置于恒温培养箱30℃下培养3~7天。