[发明专利]β2受体生物传感器、其制备方法及其应用

权利要求书

1.一种β2受体生物传感器，为三电极体系传感器，对电极是铂电极，参比电极是饱和甘汞电极，工作电极为金电极，其特征在于在所述的金电极上修饰有重组β2肾上腺素能受体，该重组β2肾上腺素能受体为SEQ ID NO：1所示的碱基序列。

2.一种制备根据权利要求1所述的β2受体生物传感器的方法，其特征在于该方法的具体步骤为：

a. 将预处理好的金电极浸入1 mM 巯基丙酸MPA溶液中修饰过夜；

b. 将步骤a所得的金电极浸入含400 mM 1-乙基-3-（3-二甲基氨基丙酸）碳二亚胺盐酸盐EDC、200 mM N-羟基琥珀酰亚胺NHS的水溶液中10 min，超纯水彻底清洗后浸入含100 mM 组氨酸的水溶液中10 min，超纯水清洗；

c. 将步骤b所得金电极浸入1 μg/mL的氧化镍（NiO）纳米颗粒水溶液中10 min，超纯水清洗；

d. 将步骤c所得金电极浸入0.27mg/mL的增溶β2受体蛋白水溶液中10-30 min，经超纯水清洗得到经β2受体修饰的金电极；

e.将步骤d所得金电极作为工作电极与铂电极和饱和甘汞电极一起组成三电极体系的β2受体生物传感器。

3.根据权利要求2所述的方法，其特征在于所述的增容β2受体蛋白的制备方法是：

a.将β2受体基因的重组工程菌细胞膜用1% DDMN-十二烷基-β-D-麦芽苷-PBS缓冲液进行增溶处理，0 ??C 45min，18000g离心20min，取上清液即为均质的增溶β2受体蛋白溶液；

b.将步骤a所得增溶β2受体溶液加入Ni²⁺-NTA亲和柱吸附，经50mM咪唑高盐缓冲液洗柱三次后用200mM咪唑高盐缓冲液洗脱，部分收集即获得β2受体蛋白。

4.一种检测β2激动剂的方法，采用根据权利要求1所述的β2受体生物传感器进行检测，其特征在于该方法的具体步骤为：

    a. 将工作电极浸入到含有待测样品中，0 ??C，30 min，超纯水清洗； 

b. 在20 ??C温度下，将经步骤a后的工作电极浸入到5.0 mL检测缓冲溶液中，所述的检测缓冲溶液为浓度为0.5 M的 K₃Fe(CN)₆/ K₄Fe(CN)₆的磷酸盐缓冲液，其pH为 7.4。

c. 循环伏安法进行电化学扫描；参数设置：扫描范围-0.1~0.55 V，扫描速率100 mV/s。