[发明专利]一种东海乌参酶溶性胶原蛋白的提取纯化方法有效
| 申请号： | 201310094792.9 | 申请日： | 2013-03-22 |
| 公开（公告）号： | CN103184262A | 公开（公告）日： | 2013-07-03 |
| 发明（设计）人： | 郑裕国;林赛君;薛亚平;单恩莉;沈寅初 | 申请（专利权）人： | 浙江工业大学 |
| 主分类号： | C12P21/06 | 分类号： | C12P21/06;C07K1/14 |
| 代理公司： | 杭州天正专利事务所有限公司 33201 | 代理人： | 黄美娟;冷红梅 |
| 地址： | 310014 浙*** | 国省代码： | 浙江;33 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 一种 东海 乌参酶溶性 胶原 蛋白 提取 纯化 方法 | ||
1.一种东海乌参酶溶性胶原蛋白的提取纯化方法，所述方法包括：
（1）取洁净块状东海乌参用0.2M、pH8.0的EDTA溶液浸泡5～6天，每天更换EDTA溶液；
（2）水洗后，加入冰块，用不锈钢匀浆机进行匀浆均质后，离心取沉淀物进行下一步操作；
（3）步骤（2）沉淀加入10～20倍体积的0.1M、pH8.0的Tris-HCl溶液，搅拌2～4天，充分溶解组织蛋白，离心后取沉淀物进行下一步操作；
（4）步骤（3）沉淀加入10～20倍体积的0.1M NaOH搅拌2～4天，每天更换NaOH溶液，离心、取沉淀再加入10～20倍体积的0.1M NaOH搅拌24h，离心、取沉淀用水洗至中性，离心取沉淀物进行下一步操作；（5）步骤（4）所得沉淀加入足量含300w～800w U/L胃蛋白酶的0.5M乙酸溶液提取2～4天，离心得到上清液1，沉淀物再次加入足量含300w～800w U/L胃蛋白酶的0.5M乙酸溶液提取24h，离心得到上清液2；
（6）合并上清液1和上清液2，加入4M NaCl至NaCl终浓度为0.8M，盐析，静置1～2h后，离心、取沉淀物；
（7）步骤（6）所得沉淀物加入9～10倍体积的0.5M乙酸溶液溶解，用截留分子量7000Da的透析膜进行透析，先用0.02M、pH8.0的Na2HPO4溶液透析48h，换0.1M乙酸溶液透析48h，再换去离子水透析48h，产物冻干，即为所述酶溶性胶原蛋白；上述步骤（1）～（7）均在4℃下进行。
2.如权利要求1所述的方法，其特征在于步骤（3）Tris-HCl溶液中还添加有：0.5M NaCl，4～50mM EDTA和0.2Mβ-巯基乙醇。
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