[发明专利]一种降解石油的耐油耐盐菌株及其筛选方法和应用

权利要求书

1.一种降解石油的耐油耐盐菌株，其特征在于：名称为SY-1，分类名称：大肠埃希氏菌Escherichia coli，保藏编号为：CGMCC No.7075，保藏日期：2012年12月31日，保藏地址为：北京市朝阳区北辰西路1号院3号，中国科学院微生物研究所，保藏单位：中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心。

2.根据权利要求1所述的降解石油的耐油耐盐菌株，其特征在于：所述菌株对石油的降解率为40%-50%。

3.根据权利要求1所述的降解石油的耐油耐盐菌株，其特征在于：所述菌株使用的培养基配方：KH₂PO₄ 3.4 g，Na₂HPO₄ 1.5 g，（NH₄）₂SO₄ 4.0 g，MgSO₄ 0.7 g，NaCl 1.6 g，酵母粉0.01g，Tween-80 0.6 mL，石油5.0~25.0 g，自来水1000 mL，pH 7.2～7.6，不同阶段添加不同含量石油。

4.根据权利要求1所述的石油的耐油耐盐菌株，其特征在于：所述菌株以石油为唯一碳源。

5.根据权利要求1所述的降解石油的耐油耐盐菌株，其特征在于：所述菌株的耐盐性为 NaCl质量浓度为7%。

6.根据权利要求1所述的降解石油的耐油耐盐菌株，其特征在于：所述菌株对石油的耐性为石油质量浓度为10%。

7.一种如权利要求1至6任一项所述的降解石油的耐油耐盐菌株的筛选方法，其特征在于：筛选步骤如下：

⑴取样：选取某油田储油罐和采油井处2-10 cm的土壤，除去杂物将其装入无菌自封袋内备用；

⑵菌株初筛：称取土壤样品制成土壤悬液，按体积比为1：8~12将土壤悬液加入到石油质量浓度为0.5%的无机矿物盐培养液中，培养3 d后进行4个周期的菌种驯化，驯化步骤是：按体积比为1：8~12取上一次的培养液加入到含有石油的无菌无机矿物盐培养液中（石油浓度从0.5-2.5 g/100mL，每次增加0.5 g石油），取最后一次驯化菌液，梯度稀释成10^-1，10^-2，10^-3，10^-4，10^-5，10^-6，10^-7，分别取10^-5，10^-6，10^-7稀释菌液0.5mL分别加入到牛肉膏蛋白胨、PDA培养基、高氏1号固体培养基平板上，涂布均匀，于30℃培养2-3 d，挑取不同菌落形态的菌株，保存备用；

⑶菌株复筛；挑取步骤⑵中分离保存的菌株，分别接种到含有0.5 g石油/100mL无机矿物盐培养基固体平板上，分别于30℃培养2-3 d，挑取在菌落周围形成噬油斑的菌株，划线分离为单菌株，保藏备用；

⑷菌株耐油特性：将步骤⑶中待测定的菌株活化后种子液，按3%的接种量接入每100 mL含石油分别为0.5 g、1 g、2 g、4 g、 6 g、8 g、10 g、12 g的无机盐矿物培养液中，30℃、160~200 r/min培养6~8 d，取培养液颜色改变并变浑浊的菌株进入下一步；

⑸菌株耐盐特性：将步骤⑷中待测定菌株活化后分别以3%的接种量接入每100 mL含质量分数为1%、3%、5%、7%和9%的NaCl的牛肉膏蛋白胨培养基中，30℃，160~200 r/min，培养10~14 h， 在质量浓度为7%的NaCl中能够生长的菌株即为降解石油的耐油耐盐菌株。

8.如权利要求1至6任一项所述的降解石油的耐油耐盐菌株在对石油污染地进行生态修复中的应用。

9.如权利要求1至6任一项所述的降解石油的耐油耐盐菌株在制备石油污染地生态修复的菌种发酵剂中的应用。

10.一种利用如权利要求1至6任一项所述的降解石油的耐油耐盐菌株制备得到的菌种发酵剂。