[发明专利]ang2在制备ECTC血管类型肝癌诊断试剂及治疗药物中的应用

说明书

技术领域

本发明属于基因工程领域，具体涉及ang2及其在制备ECTC血管类型肝癌诊断试剂及治疗药物中的应用。

背景技术

原发性肝细胞肝癌（hepatocellular carcinoma,HCC）是世界上最常见的恶性肿瘤之一，其发生率和死亡率均高居各种恶性肿瘤前列。众所周知，癌症难以根治的主要原因是局部复发和远处转移。一般认为，肝脏丰富的血管系统以及肝癌活跃的血管生成，是肝癌患者易于发生血行转移，尤其是早期肝内播散的重要因素。但是，肝癌中微血管的数量与肝癌复发转移的相关性尚存争议。而我们发现：肝癌中存在ECTC（endothelium-coated tumor cell clusters，内皮细胞包绕肿瘤团块）和非ECTC（non-ECTC）两种血管结构，前者的血管呈网络状连接，将肿瘤块包绕分割；后者的血管则为分散的管状结构。更为重要的是，与non-ECTC肝癌相比，ECTC肝癌组织中镜下微小转移灶更多，行根治性切除术后复发率更高、生存时间更短。这提示：ECTC血管结构很可能为癌细胞生长及转移提供了更强大的便利条件，因此制备ECTC血管类型肝癌诊断试剂及治疗药物具有重要的应用价值。

Sugino等最早报道了肿瘤中类似ECTC的血管结构的存在。他们将低侵袭高转移的鼠乳腺癌细胞株接种小鼠乳房脂肪垫成瘤后，观察到肿瘤中血管发展成融合的血窦样结构，并包绕肿瘤团块；而且，该细胞株虽然促血管生成能力强，但分泌MMP和侵袭能力弱。此后，该课题组在人肝癌、肾癌和甲状腺癌中都观察到癌栓被内皮细胞包绕的现象。我们之前的报道首次证明了ECTC结构与肿瘤的转移复发密切相关，是独立的预后不良预测因素。至今,关于ECTC形成的潜在机制研究只有两篇报道，他们发现：过表达VEGF-A或分泌型白细胞蛋白酶抑制因子（SLPI）可促进肿瘤细胞株成瘤组织中ECTC结构血管的形成。

Angiopoietin/Tie介导了血管的成熟，是血管生成尤其是肿瘤血管生成的重要调控通路。Angiopoietin（血管生成素）家族主要包括Aang1，ang2和ang4，其受体tie家族主要包括tie-1和tie-2。ang1是tie-2的激活剂，而ang2则作为ang1的拮抗剂，可与ang1竞争性的结合tie-2。ang4目前报道不多，其功能可能与ang1相似。而tie-1的配体尚未鉴定，tie-1可能作为tie-2的负调节因子存在。Ang1/tie-2信号激活可以维持内皮细胞处在静息状态，同时ang1还可以刺激壁细胞（血管平滑肌细胞和周细胞）覆盖到内皮细胞表面以及基底膜的沉积，使血管连接更加紧密，表现出成熟血管的特征。肿瘤中，ang1可以促进内皮细胞存活和血管成熟帮助肿瘤生长，但同时促进血管的成熟抑制肿瘤细胞侵袭血管。而ang2可拮抗ang1，使内皮细胞由静息态变为激活状态，开始增殖和出芽，生成新的血管。同时ang2还可以降低壁细胞的覆盖，使血管通透性增加，并表现出不成熟的特征。由此可见，ang1在肿瘤发展中起到双面作用。而目前多数研究认为ang2主要起到促肿瘤的作用，是抗血管药物潜在的靶分子。

国内外文献中至今未见有关ang2与ECTC血管类型的相关性研究报道。因此，进一步研究ang2在ECTC类型血管生成中的作用及其在肝癌诊治中的应用，对于制备高效的抗肿瘤血管生成药物以及肿瘤个体化治疗意义重大。

发明内容

为了解决以上技术问题，本发明的一个目的是提供肝癌患者肝组织中的ang2表达水平作为ECTC血管类型肝癌的标记的应用。

本发明的另一个目的是提供肝癌患者血液标本中ang2的表达水平作为ECTC血管类型肝癌的标记的应用。

本发明的再一个目的是提供ang2在制备用于ECTC血管类型肝癌诊断及预后的试剂中的应用。其中患者肝癌组织或血液标本中ang2的高表达指示ECTC血管类型的可能性更高，从而预测患者更容易转移和复发。本发明还提供了检测ang2表达水平的试剂在制备用于ECTC血管类型肝癌诊断预测及预后的试剂中的应用。

此外，本发明还提供了检测ECTC血管类型肝癌的试剂盒，其包含用于检测肝癌组织或血液标本中ang2的表达水平的试剂。优选地，所述检测肝癌组织或血液标本中ang2表达水平的试剂，包括ang2特异抗体。

本发明的另一目的在于提供ang2在制备治疗ECTC血管类型肝癌的药物中的应用。

为证实ang2的表达水平在作为ECTC血管类型肝癌的标记中的应用，设置了A、B两个实验，具体如下：