[发明专利]一种富油微藻的高通量筛选方法

权利要求书

1.一种富油微藻的高通量筛选方法，其特征在于富油微藻的高通量筛选方法是通过以下步骤实现：一、取微藻样品加入到培养基A中富集培养15～30天，得藻液；二、取步骤一得到的藻液，按体积百分含量为10%的接种量接种于培养基A中，在温度为25℃的光照培养箱中培养7～14天；三、重复步骤二2～3次，得藻液A；四、取步骤三得到的藻液A，按体积百分含量为10%的接种量接种于培养基B中，在温度为25℃的培养箱中培养7～14天，得藻液B；五、取步骤四得到的藻液B以无菌水按10^-1、10^-2、10^-3、10^-4、10^-5和10^-6的倍数进行稀释，将10^-5～10^-6倍数稀释后的藻液均匀涂布于固体培养基C平板上，在25℃培养箱中培养至出现藻落；六、在无菌环境中，挑取单藻落，转入到培养基B中，在温度为25℃的培养箱中培养7～14天；七、重复步骤五至步骤六3～4次，即完成藻株的分离，得到微藻液；八、取3～10mL步骤七得到的微藻液，用超声波进行破碎，在破碎后的藻液中加入尼罗红溶液，混匀后，测定藻液的荧光强度，选择荧光强度最高的藻株，即得到高油脂含量的藻株；

其中，步骤一和步骤二中所述的培养基A按重量份数是由0.1～1.5份硝酸钠、0.018～0.09份硫酸镁、0.02～0.08份磷酸氢二钾、0.009～0.054份氯化钙、0.01～0.06份碳酸钠、0.003～0.012份柠檬酸、0.003～0.012份柠檬酸铁铵、0.0005～0.01份乙二胺四乙酸和0.005～0.01份微量元素组成的；

步骤四和步骤六中所述的培养基B按重量份数是由0.1～1.5份硝酸钠、0.018～0.09份硫酸镁、0.02～0.08份磷酸氢二钾、0.009～0.054份氯化钙、0.01～0.06份碳酸钠、0.003～0.012份柠檬酸、0.003～0.012份柠檬酸铁铵、0.0005～0.01份乙二胺四乙酸、0.005～0.01份微量元素和5～50份葡萄糖组成的；

步骤五中所述的固体培养基C按重量份数是由0.1～1.5份硝酸钠、0.018～0.09份硫酸镁、0.02～0.08份磷酸氢二钾、0.009～0.054份氯化钙、0.01～0.06份碳酸钠、0.003～0.012份柠檬酸、0.003～0.012份柠檬酸铁铵、0.0005～0.01份乙二胺四乙酸、0.005～0.01份微量元素、5～50份葡萄糖和5～20份琼脂组成的；

步骤八中所述的藻液与尼罗红溶液的体积比为3:1000。

2.根据权利要求1所述的一种富油微藻的高通量筛选方法，其特征在于步骤一中所述的微藻样品为小球藻、栅藻、硅藻、隐甲藻、扁藻、杜氏藻、螺旋藻、金藻中的一种或几种按任意比混合。

3.根据权利要求1所述的一种富油微藻的高通量筛选方法，其特征在于步骤一和步骤二中所述的培养基A按重量份数是由1份硝酸钠、0.075份硫酸镁、0.04份磷酸氢二钾、0.036份氯化钙、0.02份碳酸钠、0.006份柠檬酸、0.006份柠檬酸铁铵、0.001份乙二胺四乙酸和0.00541份微量元素组成的。

4.根据权利要求1所述的一种富油微藻的高通量筛选方法，其特征在于步骤四和步骤六中所述的培养基B按重量份数是由0.5份硝酸钠、0.075份硫酸镁、0.04份磷酸氢二钾、0.036份氯化钙、0.02份碳酸钠、0.006份柠檬酸、0.006份柠檬酸铁铵、0.001份乙二胺四乙酸、0.00541份微量元素和10份葡萄糖组成的。

5.根据权利要求1所述的一种富油微藻的高通量筛选方法，其特征在于步骤五中所述的固体培养基C按重量份数是由0.5份硝酸钠、0.075份硫酸镁、0.04份磷酸氢二钾、0.036份氯化钙、0.02份碳酸钠、0.006份柠檬酸、0.006份柠檬酸铁铵、0.001份乙二胺四乙酸、0.00541份微量元素、10份葡萄糖和15份琼脂组成的。

6.根据权利要求1、3、4或5所述的一种富油微藻的高通量筛选方法，其特征在于所述的微量元素为0.00286重量份的硼酸、0.00181重量份的氯化锰、0.00039重量份的钼酸钠、0.000222重量份的硫酸锌、0.000079重量份的硫酸铜和0.000049重量份的硝酸钴。