[发明专利]一种头孢类抗生素的免疫亲和柱及其制备方法

权利要求书

1.一种检测头孢类抗生素的免疫亲和柱，由空柱管和琼脂糖凝胶组成，琼脂糖凝胶上偶联了抗头孢类抗生素的单克隆抗体；

所述单克隆抗体为单克隆细胞株，已保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，保藏编号CGMCC No.7201。

2.权利要求1所述检测头孢类抗生素的免疫亲和柱的制备方法，其特征在于制备步骤为：

（1）偶联：预先将纯化好的抗头孢类抗生素单克隆抗体CGMCC No.7201置于pH8.3含有0.5M NaCl的0.1M NaHCO₃偶联缓冲液中透析12h；将用适量溴化氰活化的琼脂糖干粉Sepharose4B用1mM盐酸使其溶胀，然后在砂心漏斗中用偶联缓冲液快速抽洗除去杂质；然后迅速倒入抗头孢氨苄单克隆抗体溶液中，混匀，室温下震荡充分反应1h；用5倍体积以上的偶联缓冲液洗去未偶联的抗头孢类抗生素单克隆抗体，得到琼脂糖-单抗偶联复合物；

（2）封闭活性基团：将琼脂糖-单抗偶联复合物转入5倍体积pH8.0的含0.5M NaCl的0.1M Tris-HCl缓冲液中，保持2h，以封闭琼脂糖凝胶中多余的活性基团；

（3）洗涤：步骤（2）得到的琼脂糖-单抗偶联复合物用5倍载体体积的pH4.0的含0.5M NaCl的0.1M醋酸缓冲液和5倍载体体积的pH8.0的含0.5M NaCl的0.1M Tris-HCl缓冲液各淋洗一次，此洗涤过程重复三次，然后用5倍载体体积的PBS洗涤两次；

（4）防腐处理：步骤（3）制备好的琼脂糖-单抗偶联复合物如需放置一段时间，应使用含有1／10000叠氮钠的PBS缓冲液浸泡，然后沥去多余的溶液后放入包装袋或瓶中在4℃密封保存；

（5）装柱：将步骤（3）或（4）得到的琼脂糖-单抗偶联复合物填充入55×6mm固相萃取空柱管中，在一定负压下用PBS将凝胶压紧，5％甲醇平衡备用，即制成头孢类抗生素免疫亲和柱；

（6）保存：琼脂糖一单抗偶联复合物或填充好的头孢类抗生素免疫亲和柱切勿冷冻，保存在4℃的冰箱内。