[发明专利]一种基于顺磁纳米Fe-Ni合金探针间接富集的NMR食源性致病菌快速检测方法

权利要求书

1.一种基于顺磁纳米Fe-Ni合金探针间接富集的NMR食源性致病菌快速检测方法，其特征步骤如下：

1）在样品中加入检测目标菌的特异性第1抗体，若样品中存在目标菌，则通过抗体抗原的结合形成1抗复合物；

2）检测目标菌的第1抗体的抗体，即2抗包被顺磁纳米Fe-Ni合金探针的制备；

3）将目标菌特异性第1抗体在固相载体上的固定备用；

4）富集目标菌株，并分离：在第1步处理过的样品，加入第2步制得的顺磁纳米Fe-Ni合金探针，充分混合震荡反应一段时间，抓取目标菌后施加外加磁场，由于纳米Fe-Ni合金具有顺磁特性，Fe-Ni合金探针会聚集到磁场一边，吸走上清液则可以分离出探针，若待检样本中有目标菌，则首先会在第1步时与1抗形成1抗复合物，1抗复合物会再与探针表面的2抗复合，通过外加磁场而被富集、分离、洗涤、磁分离后加少量无菌的去离子水则形成目标菌的顺磁纳米Fe-Ni合金探针悬浊液，此时，捕到和未捕到1抗复合物的Fe-Ni合金探针还是混在一起；

5）将富集的Fe-Ni合金探针悬浊液加到第2步固定了单克隆抗体的固相载体上，若存在目标菌则形成双抗夹心，用无菌的去离子水清洗，则没有抓取到目标菌的探针就被洗掉，若不存在目标菌，则所有探针都被洗掉；

6）之后，用洗脱剂将固定板上的双抗夹心的探针洗下来，用外加磁场分离探针的方法用无菌的去离子水清洗掉离子和溶剂，如果还存在探针就是抓到目标菌的探针；

7）这部分探针，加入无菌的去离子水形成探针的悬浊液，进行核磁共振的弛豫时间测定，在固定场强下，无菌的去离子水的T1/T2是一个恒定值，以无菌的去离子水为空白，测得的悬浊液的弛豫时间T1/T2相比无菌的去离子水有显著降低，则说明含有探针，从而间接证明样本中有目标致病菌，探针的量与T1/T2的下降呈正比，可以通过加标定量探针而间接定量出目标菌的量。

2.根据权利要求1所述的基于顺磁纳米Fe-Ni合金探针间接富集的NMR食源性致病菌快速检测方法，其特征是所述NMR纳米探针为具有顺磁特性的纳米Fe-Ni合金材料。

3.根据权利要求1所述的基于顺磁纳米Fe-Ni合金探针间接富集的NMR食源性致病菌快速检测方法，其特征是所述的目标菌的最终检出评价方法基于核磁共振技术的弛豫时间特性参数的变化。

4.根据权利要求1所述的基于顺磁纳米Fe-Ni合金探针间接富集的NMR食源性致病菌快速检测方法，其特征是所述NMR弛豫时间特性，是指自旋-晶格弛豫时间(T1)和自旋-自旋弛豫时间(T2)。

5.根据权利要求1所述的基于顺磁纳米Fe-Ni合金探针间接富集的NMR食源性致病菌快速检测方法，其特征是所述弛豫时间特性，T1采用180°-τ-90°脉冲方法测定，T2采用CPMG序列方法测定。

6.根据权利要求1所述的基于顺磁纳米Fe-Ni合金探针间接富集的NMR食源性致病菌快速检测方法，其特征是所述的1抗为检测目标菌的特异性抗体，最好是单抗，2抗为第1抗体的抗体。