[发明专利]用于检测人类白细胞HLA-B27抗原基因的引物组及试剂盒

说明书

技术领域  本发明属于生物技术领域，特别涉及一种用于检测HLA-B*27低/高分辨基因分型测定试剂盒(PCR-SSP法)。 

背景技术  HLA-B*27是B基因座编码的MHC I类表面抗原，位于第6染色体上，并递呈微生物抗原到T细胞，HLA-B*27亚型为B*2701-2752。HLA-B*27同一系列自免疾病血清学阴性的强直性关节炎相关(ankylosing spondylitis，AS)。早在1973年Schlosstein和Brewerton等发现HLA-B*27抗原与AS呈高度相关，是迄今为止所知的HLA与疾病相关性中最强的。HLA-B*27的检测有助临床对强直性脊柱炎的诊断。 

随着国内外对HLA-B*27的不断深入研究，现已发现79种HLA-B*27亚型(B*2701-2752)，但各亚型与AS间的相关性却存在着许多不同。迄今为止，在AS患者中已检测到B*2701、2702、2703、2704、2705、2706、2707、2708和2710亚型。其中，白种人AS患者与B*2705、2707相关，亚洲人AS患者与B*2705、2704和2706、2707关联，B*2703则仅见于西非AS患者。目前比较肯定的易感基因有B*2705、2704、2702而B2701、2707和2710与AS的关系因样本量不大，需进一步证实。如果某些HLA-B*27亚型与AS的相关性较其他亚型强，就可能提示这些亚型的共有多肽在AS发病机制上更为重要。强直性脊柱炎又名Marie-strümpell病、Von Bechterew病、类风湿性脊柱炎、畸形性脊柱炎、类风湿中心型等，现都称AS。遗传因素在AS的发病中具有重要作用。据流行病学调查，AS病人HLA-B*27阳性率高达90％～96％，普通人群HLA-B*27阳性率仅4％～9％；HLA-B*27阳性者AS发病率约为10％～20％，而普通人群发病为1‰～2‰，相差约100倍。有报道，AS一组亲属患AS的危险性比一般人高出20～40倍，国内调查AS一级亲属患病率为24.2％，比正常人群高出120倍。HLA-B*27阴性健康者，亲属发生AS的机率远比HLA-B*27阳性AS病人亲属低。所有这些说明HLA-B*27在AS发病中是一个重要因素。 

目前中国发病率0.3％，中国有上千万的强直性脊柱炎患者，因此强直性脊柱炎常见的疾病.HLA-B*27检测成为强直性脊柱炎极其重要的诊断标准.因此中国对于HLA-B*27检测试剂的市场需求非常大。经济效益巨大。因此人类白细胞抗原B*27血型基因检测试剂盒研制与开发具有巨大的经济效益与社会效益。 

2009年起欧美、印度、日本等国家与地区均采用HLA-B*27高分辨等位基因分型技术。多家欧美公司可提供商业试剂盒，如Inno-Train等，但其设计基础都是基于欧美人群的HLA-B*27等位基因分布频率。 

我国对检测HLA-B*27高分辨等位基因的试剂处于空白状态，目前检测HLA-B*27常用的血 

清学方法(微量淋巴细胞毒CDC)、流式细胞术(FCM)均为低分辨HLA-B*27基因分型，不能满足临床诊断和鉴别诊断的需要，不能实现对AS患者预后不良的预测和药物治疗指导。而序列特异引物-聚合酶链式反应(PCR-SSP)检测技术灵敏度高、特异性强、检验周期短、操作简便。但是目前尚无应用此种方法实现对HLA-B*27基因的快速检测。 

发明内容

本发明的目的是：克服现有技术中的不足，提供一种适合中国人群的用于检测HLA-B*27基因分型的引物组； 

本发明的第二个目的是提供一种适合中国人群的具有灵敏、特异、经济、简便、快速的用于检测人类白细胞HLA-B*27抗原基因的试剂盒。 

一种适合中国人群的用于检测HLA-B*27基因引物组，包括HLA-B*27引物对和内参引物对，所述HLA-B*27位于EXON2148-167和EXON2272-291的引物对的上、下游引物分别是序列表中SEQ ID NO.1、SEQ ID NO.2所示的核苷酸序列； 

一种用于检测HLA-B*27基因的引物组，还包括HLA-B*2702引物对、HLA-B*2704引物对、HLA-B*2705/07引物对、HLA-B*2706/04引物对、HLA-B*2706引物对和内参引物对；所述HLA-B*2702位于EXON154-72和EXON2437-456的引物对的上、下游引物分别是序列表中SEQ ID NO.3、SEQ ID NO.4所示的核苷酸序列；