[发明专利]猫泛白细胞减少症弱毒冻干疫苗的冻干保护剂

说明书

技术领域

 本发明涉及猫泛白细胞减少症弱毒冻干疫苗的冻干保护剂，具体的说是采用一定比例的牛血白蛋白、甘露醇、蔗糖、右旋糖苷、磷酸氢二钾、磷酸二氢钾、维生素C，两性霉素作为冻干保护剂，使猫泛白细胞减少症弱毒冻干疫苗的保质期达到2年。

背景技术

猫泛白细胞减少症是猫细小病毒引起的猫的一种急性、致死性传染病，其特征是高热、呕吐、出血性腹泻和造血系统抑制性白细胞减少，是猫的常见病的一种，其危害性很大。猫泛白细胞减少症病毒（Feline Panleukopenia Virus，FPV）又称猫细小病毒、猫瘟病毒、猫传染性肠炎病毒。在自然条件下，该病毒感染猫、虎、豹、熊、熊猫、鼠、鼬等动物，其中以幼猫最易感。目前尚无特效的治疗药物，主要靠进口疫苗进行预防，价格比较昂贵，疫苗供应国产化迫在眉睫，在开发弱毒疫苗的过程中，本发明选择适宜的冻干保护剂，使疫苗的保质期延长至2年，且在2-8℃储存和运输。

发明内容

本发明旨在提供一种猫泛白细胞减少症弱毒冻干疫苗的冻干保护剂配方，其特征在于冻干保护剂的主要组分重量百分比如下：牛血白蛋白0.3%、甘露醇3%、蔗糖2%、右旋糖苷1%，磷酸氢二钾0.13%、磷酸二氢钾0.045%，维生素C0.5%，两性霉素0.0625%,水为余数。

生产步骤如下：

1、从猫泛白细胞减少症弱毒株标准株分别分离的弱毒株（FPV1），经系统鉴定，并在F81猫肾细胞上培养，筛选扩充为种毒。FPV1在-80℃保存，TCID₅₀不低于10^-5，HA价≥512，对敏感断乳小猫经口服或腹腔接种，呈一过型无症状体征（血液白细胞减少到8000ml以下），但不死亡，种毒无菌。

2、细胞培养 ：F81按常规从-196℃的液氮罐内取出复苏，生长液内含1%L-谷氨酰胺、10%犊牛血清的MEM、维持液内含5%犊牛血清，并补加1%丙酮酸钠溶液，初复苏的F81采用小方瓶和克氏瓶静置培养，取10000ml血浆立瓶用作转瓶培养。

3、扩增毒液：将制备好的细胞液分装于立瓶置于血浆立瓶中采用同步接毒（转瓶培养时转速为8次/h),小牛血清≤2%，以维持液继续细胞培养3-4d，当出现75%细胞病变时振荡后取毒液收获。收获的细胞毒液冻融三次，HA价应 ≧1:128，于-30℃保存。

4、冻干前准备：将0.3%牛血白蛋白、3%甘露醇、2%蔗糖、1%右旋糖苷、0.13%磷酸氢二钾、0.045%磷酸二氢钾、0.5%维生素C、0.0625%两性霉素按量加入93%三蒸水中混合摇匀，以孔径0．22μm滤膜过滤除菌；加入等量病毒液，分装，每瓶分装1ml（每毫升含100最小免疫量），转入冷冻干燥程序。

5、疫苗冻干:将分装好的西林瓶于-35～-40℃预冷冻3—4 h再于搁板温度-30～-32℃，真空度10 Pa下，干燥8—9 h。待制品完全成型后，使搁板温度逐渐升至32℃，真空度10 Pa下再干燥2～3 h，干燥结束得到乳白色海绵状疏松团块，易于脱壁。

其优点在于：通过选择适宜的冻干保护剂，疫苗的性状、含水量、溶解性、效价均符合《中华人民共和国兽药典》第三部要求，且疫苗的保质期为2年。

具体实施方式

本发明旨在提供一种猫泛白细胞减少症弱毒冻干疫苗的冻干保护剂配方，其特征在于冻干保护剂的主要组分重量百分比如下：牛血白蛋白0.3%、甘露醇3%、蔗糖2%、右旋糖苷1%、磷酸氢二钾0.13%、磷酸二氢钾0.045%、维生素C 0.5%、两性霉素0.0625%、水为余数。

生产步骤如下：

1、从猫泛白细胞减少症弱毒株标准株分别分离的弱毒株（FPV1），经系统鉴定，并在F81猫肾细胞上培养，筛选扩充为种毒。FPV1在-80℃保存，TCID₅₀不低于10^-5,HA价≥512，对敏感断乳小猫经口服或腹腔接种，呈一过型无症状体征（血液白细胞减少到8000ml以下），但不死亡，种毒无菌。

2、细胞培养 ：F81按常规从-196℃的液氮罐内取出复苏，生长液内含1% L-谷氨酰胺、10%犊牛血清的MEM、维持液内含5%犊牛血清，并补加1%丙酮酸钠溶液，初复苏的F81采用小方瓶和克氏瓶静置培养，取10000ml血浆立瓶用作转瓶培养。