[发明专利]分泌型IgA抗心磷脂抗体检测试剂盒及使用方法无效
申请号: | 201310102068.6 | 申请日: | 2013-03-28 |
公开(公告)号: | CN103163292A | 公开(公告)日: | 2013-06-19 |
发明(设计)人: | 李立和;常玉芝;张超 | 申请(专利权)人: | 天津市宝坻区人民医院 |
主分类号: | G01N33/543 | 分类号: | G01N33/543 |
代理公司: | 暂无信息 | 代理人: | 暂无信息 |
地址: | 301800*** | 国省代码: | 天津;12 |
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摘要: | |||
搜索关键词: | 分泌 iga 磷脂 抗体 检测 试剂盒 使用方法 | ||
技术领域
一种分泌型IgA抗心磷脂抗体酶免检测试剂盒及其检测方法,属于酶免疫分析技术领域。
背景技术
抗磷脂抗体是针对一组含有磷脂结构抗原物质的自身抗体,这些抗体主要包括抗心磷脂抗体,抗磷脂酸抗体和抗磷脂酰丝氨酸抗体等。抗心磷脂抗体(ACL)阳性者在孕妇中发生反复自然流产的多于ACL抗体阴性者,在ACL抗体阳性的孕妇中,发生胎儿生长迟缓的几率约为15.0%左右,而在ACL抗体阴性孕妇中,胎儿生长迟缓的发生率仅为1.7%左右,ACL抗体与反复自然流产和胎儿发育迟缓有一定相关性。抗心磷脂抗体主要有IgG、IgM、IgA3种类型,血栓形成、习惯性流产和血小板减少主要与抗心磷脂抗体相关,抗心磷脂抗体为抗磷脂抗体中的一类,是一种累及多系统、多脏器,呈现在细胞膜上的自身抗体。抗心磷脂抗体与卵巢细胞表面的磷脂结合蛋白相互作用,干扰卵子形成、排卵,以及抗心磷脂抗体与精子或卵子表面结合,干扰受精过程。抗心磷脂抗体结合到血管内皮细胞膜磷脂上,可改变细胞膜的稳定性;结合到血小板上,可增加血小板的粘附和聚集能力。
分泌型IgA抗体(SIgA抗体)可分为血清型和分泌型,血清型多为IgA单体,分泌型多为IgA二聚体和多聚体,IgA可以单体、二聚体甚至多聚体的形式存在,聚合体不仅结合抗原的能力增强,还可使IgA能结合分泌片,赋于IgA以特殊的活性。IgA型抗体也与习惯性流产密切相关,分泌型IgA抗心磷脂抗体当累及胎盘微循环时,胎盘血管内血栓形成,影响胎盘血液循环,胚胎供血不足,便导致反复自然流产或死胎。
局部免疫SIgA是由J链连接成的双聚IgA与SC(分泌片段)结合后形成的复合物,多为二聚体或多聚体而不易检测。SIgA与IgA在免疫功能上具有不同之处,作用的最大特点是将抗原抗体的反应控制在膜免疫系统的局部,而且是以非炎症的方式限制抗原物质对粘膜表面的侵入。SIgA的重链有一个含额外半胱氨酸的C端结构,可与B细胞产生的J链相结合,使IgA形成二聚体或多聚体。聚合体不仅结合抗原的能力增强,J链对于SIgA的形成有两个重要的功能,除了使IgA形成双聚体,在多聚IgA(多聚免疫球蛋白)与SC/pIgR(多聚免疫球蛋白受体)结合的亲和性方面也起了重要作用,在排除抗原方面发挥了重要的作用,不仅可以通过聚集潜在入侵的病原体使之易于蠕动和粘液纤毛运动将其清除,而且SC能通过其糖类残基使SIgA能与沿着表皮表面的粘膜抗体锚着于适当的组织处,破坏抗原的定位,进而清除抗原,SC上的N-糖基为抗原粘附和凝集素的结合提供了很多表位,因此,SIgA抗体在生殖免疫中起到重要作用。
盐酸氨溴索为粘液溶解剂,临床上用于呼吸病人能增加呼吸道粘膜浆液腺的分泌,从而降低痰液粘度,促进肺表面活性物质的分泌,增加支气管纤毛运动,使痰液易于咳出。本品的巯基(-SH)结构可使粘蛋白的双硫(-S-S-)结构断裂,降低宫腔分泌物粘度,胃蛋白酶具有分解蛋白质的作用,使分泌型抗心磷脂抗体的多聚体转变为单体而易于ELISA法检测。采用聚苯乙烯反应板条固相吸附心磷脂抗原,在反应过程中若被检样本存在抗心磷脂抗体,则与板条中包被的心磷脂抗原结合,形成抗原-抗体复合物,再与酶标记的二抗形成抗原-抗体-抗抗体复合物,并结合在微孔壁表面,通过底物作用在相应检测孔中出现蓝色,用以特异性的检测分泌物中的抗心磷脂抗体。
发明内容
本发明的目的是提供一种样品前处理简单,提取后可直接测定,简便、快速、灵敏、准确的检测分泌型IgA抗心磷脂抗体的方法。
本发明试剂盒主要由盒体(1),酶标板(2)中设有反应孔(3)的板条,A试剂瓶(分泌物前处理液)(4),B试剂瓶(酶标记的抗心磷脂二抗)(5),C试剂瓶(含吐温-20的磷酸盐PBS溶液)(6),D试剂瓶(邻苯二胺OPD试剂)(7),E试剂瓶(H2O2)(8),F试剂瓶(硫酸溶液)(9),塑料托架(10)及酶标板(2)均放在盒体(1)内。
本发明的原理是采用盐酸氨溴索分解宫腔分泌物分泌型IgA抗心磷脂抗体,然后采用酶联免疫吸附(ELISA)法检测分泌型抗心磷脂抗体。
具体实施方式
一、抗心磷脂抗体酶标板的制备
将心磷脂抗原用包被液稀释成1∶200倍,加入100μl包被微孔反应板的微孔,加入含1%小牛血清白蛋白磷酸盐缓冲液350μl/每孔,室温封闭2小时,4℃过夜。甩尽孔内液体后,用洗涤液洗3次,每次3分钟。
二、酶标记抗体的制备
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