[发明专利]一种马铃薯茎尖脱毒方法

说明书

技术领域

本发明提供了一种解决马铃薯茎尖脱毒及脱毒过程中，茎尖愈伤化导致基因变异和脱毒周期长的方法。该技术属于生物技术领域。

背景技术

马铃薯在种植过程中感染病毒而引起退化直接影响了马铃薯的品质及产量,严重阻碍了马铃薯的生产和利用。应用马铃薯脱毒技术,是解决马铃薯种薯退化的主要技术措施。因此，脱毒种薯越来越受到广大马铃薯栽培者的欢迎。我国在马铃薯茎尖组织培养方面也取得了很多研究成果川,并在各地建成脱毒种薯繁育体系。马铃薯茎尖组织培养脱毒苗是马铃薯脱毒种薯产业的基础,优质快速地茎尖培养为以后脱毒苗和脱毒薯的生产赢得了时间和效益。通过组织培养途径，从而建立无病毒生产体系是目前非常有效的获得无病毒植株的途径。当前脱毒马铃薯茎尖培养效率低,成苗率和脱毒率达不到预期目的,因此优化马铃薯茎尖脱毒培养方法非常必要。

马铃薯茎尖脱毒标准程序如下：块茎、植株或芽条（或者带病毒试管苗）；结合热处理（36℃，16小时光照；8小时黑暗，30℃）；表面清洗之后，常规消毒处理；解剖镜下剥离分生组织约0.1～0.3mm、带1～2个初生叶原基；在无菌条件下操作；接入已灭菌的分生组织培养基培养（4-5个月）；待分生组织分化后，转入生长培养基成苗（15-20天）；具5～7叶的茎尖分化苗扩繁（15-20天转接一次）；各株系茎尖分化苗的病毒及类病毒检测；无病原菌的试管苗留作基础种苗；至少一个生长季节；经遗传稳定性鉴定后工厂化快繁用。

该技术是目前马铃薯茎尖脱毒的一般程序，但存在不少缺点：

1、脱毒周期长、环节多，要经过热处理使病毒钝化，茎尖剥离以后进行愈伤及成苗培养，获得脱毒苗以后还需要进行稳定性鉴定。

2、对技术和设备要求高，需要解剖镜，茎尖剥离的操作很细致，茎尖不能过大或过小，过大脱毒率低，过小不易成活，一般要求0.1-0.3mm，带1-2个叶原基最宜。

3、脱毒苗可能发生变异，茎尖剥离后的愈伤培养会在培养基内加一些激素，分生组织受这些激素影响可能会产生遗传变异，并且马铃薯茎尖细胞小，有可能遗传物质不完全。

发明内容

本发明所要解决的技术问题是针对现有技术的不足提供一种马铃薯茎尖脱毒方法。

本发明的技术方案如下：

一种马铃薯茎尖脱毒方法，包括以下步骤：

A1、将需要脱毒的原原种进行田间播种；

A2、植株生长期常规管理；

A3、在现蕾或开花期从马铃薯地里筛选健康的植株，做好标记，较其他植株提前半个月收获，每株筛选个大，薯型标准和健康的种薯单独收获和贮存；

A4、种薯发芽后，剪取幼芽进行病毒检测；

A5、将检测健康的种薯，重新催芽后剪取大芽经酒精和升汞杀菌处理后，放于常规MS固体培养基上做成茎段苗；

A6、将长高的茎段苗，剪取上部三分之一高度保种，剩余三分之二进行病毒检测；

A7、病毒检测合格后，按照常规方法进行快繁。

通过本技术可以在相对短的周期内获得马铃薯脱毒试管苗，得到的脱毒试管苗健康，遗传基因稳定。因为材料为脱毒原原种，经过田间正向选择，脱毒率高，提高了脱毒效率。

具体实施方式

以下结合具体实施例，对本发明进行详细说明。

本发明的马铃薯茎尖脱毒方法包括以下步骤：

1、将需要脱毒的原原种进行田间播种。

2、植株生长期常规管理。

3、在现蕾或开花期从马铃薯地里筛选健康的植株，做好标记，较其他植株提前半个月收获，每株筛选个大，薯型标准和健康的种薯单独收获和贮存。

4、种薯发芽后，剪取幼芽进行病毒检测。

5、将检测健康的种薯，重新催芽后剪取大芽经酒精和升汞杀菌处理后，放于常规MS固体培养基上做成茎段苗。

6、将长高的茎段苗，剪取上部三分之一高度保种，剩余三分之二进行病毒检测。

7、病毒检测合格后，按照常规方法进行快繁。

表1

注：大写字母表示差异极显著(p<0.01)，小写字母表示差异显著(p<0.05)。

本发明技术简化了茎尖剥离的步骤，显著降低了茎尖剥离技术难度，使再生植株由弱苗变壮苗，变传统多步骤成苗为一步成苗，成苗时间为20天左右（见表1），缩短脱毒周期约33.3%-60%，实现了从薯块到脱毒苗长周期变短周期的跨越；增加成苗率44%以上，改善了茎尖剥离成苗困难的现状；提高脱毒率36%以上，突破了马铃薯常规脱毒法PVS和PVM难以脱除的技术瓶颈。