[发明专利]一种人源性可溶型CD74蛋白的ELISA检测试剂盒及检测方法

说明书

技术领域

本发明属于免疫学和生物技术领域，具体涉及一种人源性可溶型CD74蛋白的ELISA检测试剂盒及其检测方法。

背景技术

CD74即主要组织相容性复合物Ⅱ类分子相关恒定链（major histocompatibility complex,MHC-Ⅱ-associated invariant chain,Ii），又称为HLA-DRγ，在人类其基因定位于5号染色体长臂3区1带至3区3带（5q31-q33），包含9个外显子。CD74主要在树突状细胞、单核巨噬细胞、B细胞、朗罕氏细胞等抗原递呈细胞中表达。作为MHC-Ⅱ类分子伴侣，CD74的主要功能与抗原递呈有关；作为Ⅱ型膜蛋白，还有2-5%的CD74在细胞膜上表达，其功能和MHC-Ⅱ类分子无关。近来研究发现CD74是巨噬细胞移动抑制因子（Macrophage Migration Inhibitory Factor,MIF）的受体，与MIF结合可激活NF-κB、ERK1/2等信号转导途径，进而诱导炎性细胞因子的分泌；研究还发现，CD74除了表达于抗原递呈细胞，与抗原递呈有关外，CD74蛋白还在内皮细胞、肿瘤细胞表达，与相应疾病的发生、发展相关。

已有研究证实CD74参与了某些炎症性疾病或自身免疫性疾病的发病过程。与健康人群相比，动脉粥样硬化病人的斑块和外周血单核细胞中的CD74表达增高。具有动脉硬化斑块形成倾向的Ldlr基因敲除小鼠，如同时缺失CD74基因，则动脉粥样硬化的程度减轻。可自发形成糖尿病的NOD小鼠，如果敲除CD74基因，则血糖水平降低。就系统性红斑狼疮而言，两种具有狼疮倾向的小鼠品系，其循环血液中MIF水平的升高与疾病的发展和肾小球性血管炎的形成具有密切的时间依赖关系。同时，肾脏MIF，CD74，和CD44（CD74的协同分子）mRNA和蛋白的表达也随着炎症的发展显著升高。最近研究发现来源于系统性红斑狼疮小鼠的B细胞，其MIF和CD74的表达均明显增高，如激活这类B细胞的MIF/CD74通路，则可延长系统性红斑狼疮小鼠的存活时间。

慢性炎症的病程后期组织发生恶变可形成肿瘤。幽门螺杆菌（Helicobater pylori，HP）感染时，胃上皮的CD74表达明显增加。HP的尿素酶可直接与胃上皮的CD74蛋白结合，结合的同时促进CD74基因和蛋白的表达。细胞表面累积的CD74导致了胃上皮的持续炎症。CD74的配体MIF在HP感染时也显著增高。MIF通过结合CD74激活胞内信号途径NF-κB和ERK1/2，促进炎性细胞因子的产生，加快细胞增殖和延长细胞存活。由HP引发的长期炎症刺激可演变成为慢性胃炎，形成胃溃疡，并最终引发胃的恶性病变。

CD74不仅是MHC-Ⅱ类分子伴侣，并参与炎症和自身免疫性疾病的发病过程，而且近年多篇文献报道CD74和多种肿瘤的发生发展相关。如Ishinami等研究发现，CD74表达阴性的胃癌患者术后预后优于CD74表达阳性的患者；Nagata等发现CD74可作为预测胰腺癌的生物分子标志物。此外，CD74及其配体MIF在多种肿瘤中高表达，如肺癌、胶质母细胞瘤、宫颈癌、膀胱癌、肾癌。在慢性淋巴细胞白血病中，MIF/CD74通过NF-κB途径促进B细胞分泌IL-8，分泌的IL-8进一步诱导了抗凋亡蛋白Bcl-2的转录和翻译，从而促进了B细胞的存活。此外，MIF/CD74还能通过上调TAp63直接调控Bcl-2蛋白，从而影响B细胞的存活。Hertlein等发现在慢性淋巴细胞白血病患者中，疗效甚好的CD74单克隆抗体Milatuzumab并不像其他单抗那样通过特异性结合细胞膜蛋白，发生抗体依赖的细胞介导的细胞毒作用杀死靶细胞，而是通过上调靶细胞膜表面CD74的表达引起细胞凋亡达到治疗目的。

上述研究表明CD74在炎症和肿瘤中发挥了重要的作用，可能成为这些疾病的生物标记物，亦可能成为相关疾病的疗效判定和预后指标。

以往对CD74表达的研究主要是采用免疫组化、免疫荧光、Western blot以及RT-PCR等半定量的方法。通过资料检索，国内外尚无任何关于定量检测人源性CD74蛋白的报道，且目前仍无法确定CD74蛋白是否存在可溶型形式。