[发明专利]表达多肽的方法

权利要求书

1.一种表达多肽的方法，所述多肽具有SEQ ID NO:1所示的氨基酸序列，其特征在于，所述方法包括：

利用重组杆状病毒表达毒种，感染第一昆虫Sf9细胞，以便使得所述第一昆虫Sf9细胞表达所述多肽，其中，所述重组杆状病毒表达毒种包含编码所述多肽的核酸分子；以及

裂解所述第一昆虫Sf9细胞，并纯化获得所述多肽。

2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述重组杆状病毒表达毒种包含SEQ ID NO：2所示的核酸序列。

3.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，利用重组杆状病毒表达毒种，感染第一昆虫Sf9细胞是通过向包含所述第一昆虫Sf9细胞悬液中加入所述重组杆状病毒表达毒种，并共同培养预定时间而完成的。

4.根据权利要求3所述的方法，其特征在于，共同培养96小时后，裂解所述第一昆虫Sf9细胞。

5.根据权利要求3所述的方法，其特征在于，所述第一昆虫Sf9细胞悬液的密度为2×10⁶个细胞/ml。

6.根据权利要求4所述的方法，其特征在于，所述共同培养是在28℃下进行的。

7.根据权利要求4所述的方法，其特征在于，所述共同培养是在悬浮条件下进行的。

8.根据权利要求4所述的方法，其特征在于，所述共同培养是在170rpm的转速下进行悬浮培养的。

9.根据权利要求5所述的方法，其特征在于，每15毫升2×10⁶个细胞/ml的第一昆虫Sf9细胞悬液中加入1.6ml所述重组杆状病毒表达毒种，

其中，所述重组杆状病毒表达毒种是通过下列步骤获得的：

利用编码所述多肽的杆状病毒质粒转染第二昆虫Sf9细胞，在转染72小时后，裂解所述第二昆虫Sf9细胞，以便获得病毒原种P1；

在六孔板的每孔加入1×10⁶个细胞/ml的第三昆虫Sf9细胞悬液2ml，孵育1h，镜下观察确定细胞贴壁，向每孔中各加入200μl所述病毒原种P1，28℃培养，感染48-72小时后，每孔收集约2ml含病毒的上清培养基，500g离心5min，弃碎片收上清，以便获得P2病毒；

在25cm²培养瓶中加入1×10⁶个细胞/ml的第四昆虫Sf9细胞悬液8ml，孵育1h，再向所述25cm²培养瓶中加入80μl所述P2病毒，28℃培养，感染72小时后，将所述含有病毒的培养基在500g下离心5min，弃碎片收上清，以便获得P3病毒；以及

在75cm²培养瓶中加入1×10⁶个细胞/ml的第五昆虫Sf9细胞悬液20ml，孵育1h，再向所述75cm²培养瓶中加入300μl所述P3病毒，28℃培养，感染72h后，将所述含有病毒的培养基在500g下离心5min，弃碎片收上清，以便获得150ml所述重组杆状病毒表达毒种。

10.根据权利要求9所述的方法，其特征在于，所述编码所述多肽的杆状病毒质粒包含SEQ ID NO：2所示的核酸序列。