[发明专利]一种采用磁珠法提取病毒DNA或RNA的试剂盒及其使用方法

说明书

技术领域

本发明属于分子生物学技术领域，尤其涉及一种采用磁珠法提取病毒DNA或RNA的试剂盒及其使用方法。 

背景技术

核酸研究是现代生物学、医学研究中的重要课题。核酸作为遗传信息的携带者，是基因表达的物质基础，除了在生物体正常的生长、发育、和繁殖等生命活动中具有十分重要的作用外，它与生命的异常情况，如肿瘤发生、放射损伤、遗传疾病等也有密切关系。因此核酸是现代生物学、医学研究中的重要课题。无论是进行核酸结构与功能的研究，还是进行基因工程、蛋白质工程等的研究，首先都需要对核酸进行分离纯化。 

在分子生物学研究的初期，核酸分离技术包含沉淀，离心等过程，这些纯化方法的步骤繁杂，费时长，接触有毒试剂，产物纯度和回收率难于满足实验要求，而且难以实现自动化和大规模运用。 

目前核酸分离技术虽然得到了很大的发展，但均存在一些缺点：例如， 

有机法：有机法提取核酸一般是指用平衡酚、氯仿等按不同比例混合，提取核酸。有机法提取核酸应用范围广，适合各种生物样本，对富含蛋白质、多脂的生物样本更为有效。但是有机法应用有毒有机试剂，对人体有害，污染环境；多次换管，容易引起样本交叉污染。

NaOH法：NaOH法提取DNA是通过强碱溶解、变性蛋白质，使细胞膜及核膜破坏，核酸酶变性，释放DNA。NaOH法提取DNA的主要缺点是DNA保存于碱中不稳定，4℃放置24h后PCR扩增不易成功，且不能用于提取RNA。 

硅胶膜离心柱法：硅胶膜离心柱法提取核酸是通过异硫氰酸胍或盐酸胍等强烈蛋白变性剂的离液盐，破坏细胞膜及核膜蛋白，使核酸酶失活，释放核酸；然后硅胶膜可以特异性吸附核酸；通过离心和清洗液洗涤，在吸附核酸的硅胶膜上加入洗脱液，核酸释放于洗脱液中，经离心后，获得核酸溶液。其中，裂解液配方和用量、硅胶膜种类、洗脱液用量都会影响核酸纯化效果。硅胶膜离心柱法虽然是一种很好的核酸提取方法，但对试剂配制要求很严格，仍需多次离心，难于实现自动化。 

磁珠法提取核酸是近几年才发展起来的核酸提取方法，其采用纳米级磁珠微珠，这种磁珠微珠的表面标记了一种官能团，能同核酸发生吸附反应。该提取方法不需要苯酚和氯仿等毒性大的有机溶剂，提取的核酸纯度高、产量高。磁珠微珠在磁场条件下可以发生聚集或分散，从而可彻底摆脱离心等所需的手工操作流程，方法操作简单，不需要特殊的分离设备，实现自动化提取核酸。 

目前已有不少公司根据磁珠法的原理开发出了应用于核酸纯化的试剂盒，如Promega、Roche、Merck、Invitrogen等公司。这些试剂盒针对不同的材料来源设计了不同的提取方法，操作简单、高效，核酸质量较高，但价格昂贵。 

因此目前还需要开发一些操作简单、成本低、高效地提取DNA或RNA的核酸提取试剂盒。 

发明内容

为了克服现有技术的不足，本发明的目的在于提供一种专门用于从血清或血浆等液体样本中快速地分离纯化微量病毒DNA或RNA，且环保、大通量、操作简单、成本低、提取的DNA或RNA质量好的采用磁珠法提取病毒核酸的试剂盒及其使用方法。 

本发明的技术方案为：一种采用磁珠法提取病毒DNA或RNA的试剂盒，所述试剂盒包括裂解液、清洗液1、清洗液2、清洗液3、洗脱液和磁珠悬浮液；其中， 

清洗液2：体积分数为75%的乙醇水溶液；

清洗液3： 0.01-0.03 mol/L的Tris水溶液，pH值为4.0~5.0； 

洗脱液：去离子水；

磁珠悬浮液：磁珠含量为40-60mg/ml，磁珠颗粒直径为1.5-2.5μm。

所述裂解液的配置方法为：称取472.6~768.0g异硫氰酸胍或477.7~716.5g盐酸胍、12.1~6.1g Tris或29.4~14.7g柠檬酸钠，用去离子水溶解后，调整pH至6.0~6.8，加入70~150ml Triton X-100、20ml 0.5M EDTA-2Na和50ml Acryl Carrier，混匀后，用去离子水定容至1000ml。 

所述清洗液1的配置方法为：称取472.6~590.1g异硫氰酸胍或382.2~573.2g盐酸胍、12.1~6.1g Tris或29.4~14.7g柠檬酸钠，用去离子水溶解后，调整pH至6.0~6.8，加入350~600ml的无水乙醇，混匀后，用去离子水定容至1000ml。 

本发明所述采用磁珠法提取病毒DNA或RNA的试剂盒的使用方法，按照如下步骤进行：