[发明专利]烟叶中蛇床子素残留量的测定方法

说明书

技术领域

本发明属于烟草中农药残留的检测领域，具体涉及为烟叶中蛇床子素残留量的测定方法。

背景技术

天然化合物蛇床子素(osthol)，是从蛇床、欧前胡等传统中草药中提取的香豆素类化合物，化学名称为7-甲氧基-8-异戊烯基香豆素，是由江苏省农业科学院联合苏科农化有限责任公司在21世纪初研发的杀菌、杀虫剂。主要用于防治蔬菜中各种白粉病、霜霉病、小菜蛾、菜青虫、蚜虫等常年危害严重的病虫害，具有高活性、微毒性、低残留等特点。随着这一产品在烟草上的大好使用前景，建立快速、准确的测定烟草中蛇床子素的分析方法十分必要。

目前关于蛇床子素化合物的分析方法报道较多，但主要为中药的常规质量控制及生物试样的检测，对其在农产品上的残留分析方法研究较少，只有陈浩等采用高效液相色谱-紫外检测器法对土壤和黄瓜中蛇床子素的残留进行了研究。有关蛇床子素的主要检测方法有液相色谱-紫外检测器法、气相色谱-火焰离子化检测器法、气相色谱-质谱联用法。由于蛇床子素结构的共轭双键较多，最大吸收波长达到322 nm，在该波长下分析检测，干扰成分相对较少，灵敏度较高，使得高效液相色谱-紫外检测器法是检测蛇床子素的主流方法。本发明提供了一种用甲醇水溶液提取，通过液液萃取和固相萃取净化后，高效液相色谱-紫外检测器法检测烟叶中的生物源新农药-蛇床子素的测定方法，具有良好的检测效果。

发明内容

本发明要解决的技术问题是提供一种用甲醇水溶液提取，通过液液萃取和固相萃取净化后，高效液相色谱-紫外检测器法检测烟叶中的生物源新农药-蛇床子素的测定方法，首次建立了生物源新农药-蛇床子素在烟叶中的残留检测方法，本方法具有操作简便，提取效率高; 所建立的色谱检测方法线性范围宽，重复性好，检测限低等优点。

本发明采用的技术方案：

本发明烟叶中蛇床子素残留量的测定方法，包括以下步骤：

（1）称取研磨的鲜烟叶，用甲醇水溶液超声提取后抽滤，用二氯甲烷萃取，合并浓缩；

（2）浓缩液依次用N-丙基乙二胺固相萃取柱和氟罗里硅土固相萃取柱净化；

（3）用高效液相色谱仪测定烟叶中的蛇床子素残留量。 

所述的甲醇水溶液为甲醇与水的体积比为1：1。

所述的浓缩液依次用N-丙基乙二胺固相萃取柱和氟罗里硅土固相萃取柱净化具体步骤为：将N-丙基乙二胺固相萃取柱用二氯甲烷预处理活化后，将浓缩液转移至柱中，用二氯甲烷洗脱分析物，将洗脱液在40 ℃下浓缩至近干，氮气吹干，再将残留物用正己烷溶解后转移至用正己烷活化的氟罗里硅土固相萃取柱中，加入正己烷淋洗萃取柱，弃去淋洗液后用正己烷与丙酮的混合溶液对分析物进行洗脱，收集洗脱液后氮气吹干，用体积比为1:1的甲醇水溶液溶解，过 0.45 μm微孔有机滤膜。

正己烷与丙酮的混合溶液为丙酮与正己烷体积比为6：4。

高效液相色谱仪的检测器为紫外二极管阵列检测器。

高效液相色谱仪的色谱条件为：Zorbax SB-C18 色谱柱；柱温25℃; 流 速1 mL /min; 进样量：20 μL；检测波长：322 nm，参比波长为400 nm；流动相为A=甲醇，B=水；时间程序：开始50%B到10 min时减少至20% B，并保持到15 min，到17 min时又升至 50% B，并保持到18 min结束。

本发明达到的有益效果：

（1）首次建立蛇床子素在烟叶中的残留检测方法

相对于现有的检测方法，该方法更合适分析复杂基质中蛇床子素中的含量，本发明用甲醇水溶液提取，通过液液萃取和固相萃取净化后获得杂质含量较少的提取成分，用高效液相色谱-紫外检测器检测具有较简单的色谱图。

（2）检测灵敏度高，线性范围宽

紫外检测器采用波长较长的参比波长（400 nm）进行比对，提高了蛇床子素在紫外检测器上的灵敏度，降低了检测限。将一定浓度的标准品添加(0.05 mg/kg)到样品中，经过前处理和上机检测分析，以S/N=3.14计算检测限（LOD），检测限为0.016 mg/kg；

将浓度梯度为0.25 ug/mL，0.5 ug/mL，1.0 ug/mL，5.0 ug/mL和10.0 ug/mL用高效液相色谱-紫外检测器分析，以浓度为横坐标，峰面积响应值为纵坐标，进行线性回归，蛇床子素的回归方程为Y=40.4827X-0.8418，R²=0.9998，表明线性关系较好，说明该方法具有检测灵敏度高，线性范围宽的优点。

（3）回收率高，精密度好