[发明专利]一种高含量红霉素B发酵液的发酵方法

说明书

技术领域

发明涉及生物与医药技术领域，特别是涉及一种高含量红霉素B发酵液的发酵方法。

背景技术

红霉素是由红霉素链霉菌(Streptomyces erythreus)所产生的一类大环内酯类抗生素，主要包括红霉素A(ErA)、红霉素B(ErB)和红霉素C(ErC)，其中以红霉素A的抗菌活力最强，B、C抗菌活力较低。故而，医疗上用的大部分都为红霉素A，而把红霉素B、C作为杂质对待，在红霉素发酵过程中也以提高红霉素A、降低红霉素B、C的含量为主要目的，因此，在红霉素药品生产过程中，需要对其中的红霉素A、B、C进行高效液相测定，从而确定药品的药效，在用高效液相测定红霉素各组分时，需要有高含量的标准品对各组分进行定性、定量。但是中国药品生物制品检定研究院未对社会公开销售红霉素B，而欧洲药典委员专门出售的红霉素B标准品价格过高，所以自制高纯度的红霉素B需要有发酵阶段提供高含量红霉素B的发酵液。在现阶段红霉素的发酵过程中，红霉素B的含量仅占总效价的1%以下，含量低不利于红霉素B的提纯。

发明内容

本发明的目的在于克服上述现有技术中的缺陷，提供一种有效提高红霉素发酵液中高含量红霉素B发酵液的发酵方法。

一种高含量红霉素B发酵液的发酵方法，其特征是：在以红色链霉菌为菌种发酵生产红霉素的过程中，控制发酵液的通气量和搅拌转速使发酵液的溶解氧含量保持在0-15%。

所述通气量按照通气比1：0.4～1.0L/L/min的用量加入。

所述搅拌转速控制在300-450转/分钟。

所述培养温度控制在31-37℃。

所述培养液的PH控制在6.7-7.3。

发酵70-100小时放罐，优选为75-96小时放罐。

本发明通过在温度31-37℃，PH在6.7-7.3的发酵体系中，控制通入无菌空气的通气比和搅拌转速来控制发酵过程中的溶解氧含量，使代谢途径发生改变，从而有效提高红霉素B的积累，提高发酵液中红霉素B的含量，为提纯红霉素B提供原料。

通过本发明方法调控发酵过程，发酵70～100hr放罐，发酵液中红霉素B含量可以达到700～1000ug/ml，提取后红霉素B达到20-30%，可以供提纯使用。

具体实施方式

实施例1

本方法采用三级发酵法，挑取新鲜的红色链霉菌的斜面孢子接入到含有淀粉、豆粉等原料的一级种子培养基中，35℃培养40hr，接入二级种子培养基中34℃培养20hr，接入灭菌后的发酵培养基（培养基组成：淀粉2-5%，豆粉2-5%，硫酸铵0.1-0.6%、碳酸钙0.2-0.8%）中进行发酵培养，培养条件：温度31-37℃，PH6.7-7.3，通入无菌空气同时开搅拌，通气比1：0.8L/L/min，发酵过程通过溶氧浓度调整搅拌转速300～450转/分钟，通过溶氧电极检测溶氧，控制溶氧10～15%，发酵94hr放罐，发酵液中红霉素B含量820ug/ml，占总效价的50%。

实施例2

本方法采用三级发酵法，挑取新鲜的红色链霉菌的斜面孢子接入到含有淀粉、豆粉等原料的一级种子培养基中，34℃培养45hr，接入二级种子培养基中33℃培养24hr，接入灭菌后的发酵培养基中（培养基组成：淀粉2-5%，豆粉2-5%，硫酸铵0.1-0.6%、碳酸钙0.2-0.8%）进行发酵培养，培养条件：温度31-37℃，PH6.7-7.3，通入无菌空气同时开搅拌，发酵过程中搅拌转速恒定400转，调整通气比1：0.4～1.0L/L/min，通过溶氧电极检测溶氧，控制溶氧5～10%，发酵96hr放罐，发酵液中红霉素B含量900ug/ml，占总效价的55%。

实施例3

本方法采用三级发酵法，挑取新鲜的红色链霉菌的斜面孢子接入到含有淀粉、豆粉等原料的一级种子培养基中，35℃培养42hr，接入二级种子培养基中34℃培养22hr，接入灭菌后的发酵培养基（培养基组成：淀粉2-5%，豆粉2-5%，硫酸铵0.1-0.6%、碳酸钙0.2-0.8%）中进行发酵培养，培养条件：温度31-37℃，PH6.7-7.3，通入无菌空气同时开搅拌，通气比1：0.6L/L/min，发酵过程通过溶氧调整搅拌转速300～450转/分钟，通过溶氧电极检测溶氧，控制溶氧0～10%，发酵75hr放罐，发酵液中红霉素B含量720ug/ml，占总效价的45%。