[发明专利]检测和分析艰难梭菌菌株的组合物和试剂盒及用该组合物和试剂盒检测艰难梭菌菌株的方法

说明书

对相关申请的交叉引用 

本申请要求2012年6月8日提交给韩国知识产权局的韩国专利申请No.10-2012-0061671的权益，通过引用将其公开内容完整收入本文。 

技术领域

本公开内容涉及包括，用于检测艰难梭菌(Clostridium difficile)菌株或有毒艰难梭菌菌株的引物套组的组合物和试剂盒，及通过使用所述组合物或试剂盒来检测样品中的艰难梭菌菌株的方法。 

背景技术

艰难梭菌是厌氧的、能形成孢子的梭菌属革兰氏阳性细菌的一个物种。 

艰难梭菌是抗生素相关腹泻的最严重原因，而且能引起假膜性结肠炎和一种严重的结肠感染，常常导致抗生素对正常肠菌群的根除。在身体中天然驻留的艰难梭菌变得过度生长。该过度生长是有害的，因为该细菌释放能引起胃气胀、便秘、和腹泻(带有腹痛)的毒素。潜在的症状常常模拟一些流感样症状。停止病因性抗生素的治疗常常能治愈。 

艰难梭菌感染在严重性上可以是从无症状到严重和危及生命的范围，尤其是在老年人中。人们最通常在医院、疗养院、或收容所(institutions)中被感染，不过社区中、门诊环境中的艰难梭菌感染也越来越多。获得艰难梭菌的比例在住院长至2周的患者中估计为13%，而在住院长过4周的患者中估计为50%。艰难梭菌结肠炎的频率和严重性仍然较高，而且似乎与死亡率升高有关。早期干预和攻击性管理是恢复的关键因素。 

艰难梭菌的毒力因子是毒素A、毒素B、一种二元毒素、和一种高毒毒素。毒素A(一种肠毒素)由tcdA基因编码。毒素B(一种肠毒素)由tcdB基因编码。二元毒素由cdtA和cdtB基因编码，而且尚未发现它的毒力机制。高毒毒素涉及有毒NAP1/BI/027菌株，而且是由Δ117tcdC SNP(单核苷酸多态性)引起的。2005年报告了一种新的、高度有毒的艰难梭菌菌株的出现，它对氟喹诺酮抗生素，诸如Cipro(环丙沙星(ciprofloxacin))和Levaquin(左氧氟沙星 (levofloxacin))有抗性，据说在北美洲引起地理性分散突发。 

在将这些毒力基因用于分子诊断时，存在基因变异所致错误发生的可能性和变异所致假阳性测定的可能性。如此，需要通过利用编码在各种艰难梭菌菌株中普遍表达的蛋白质的基因来检测艰难梭菌。 

另外，有毒艰难梭菌经由它的孢子来诱导传染性感染，带有有毒菌株的患者需要隔离。因此，需要通过在短时间内特异性检测有毒艰难梭菌菌株来实施准确且快速的诊断。 

因此，仍然需要开发通过利用以较小变异在各种艰难梭菌菌株中普遍表达的基因来初步检测艰难梭菌的方法、在短时间内以高准确度和灵敏度自检测到的艰难梭菌菌株检测有毒艰难梭菌菌株的方法、及诊断它们的方法。 

发明概述 

本发明提供了用于检测艰难梭菌菌株的组合物，其包括检测艰难梭菌菌株的引物套组。 

本发明提供了用于检测艰难梭菌菌株的试剂盒，其包括检测艰难梭菌菌株的引物套组。 

本发明提供了用于检测艰难梭菌菌株的方法，其通过使用检测艰难梭菌菌株的引物套组来进行。 

附图说明

根据下面实施方案的描述，结合附图，这些和/或其它方面会变得明白和更加容易领会，在附图中： 

图1图示曲线图和图像，显示依照例示性实施方案，通过使用具有序列SEQ ID NO：1至3、检测gluD基因的引物(见(a)和(c))及通过使用具有序列SEQID NO：4至6、检测gluD基因的引物(见(b)和(d))来检测艰难梭菌菌株的结果；在图1(c)中，最左栏为分子量标志，对应于10³列的数值23.25表示该泳带的强度与相应标志带的强度相比的相对量化值；图1(d)中的数值的含义同图1(c)； 

图2和3是曲线图和图像，显示依照例示性实施方案，通过使用具有序列SEQ ID NO：7至9、检测靶tcdA基因的引物(见各自(a))和通过使用具有序列SEQ ID NO：10和11、检测参照tcdA基因的引物(见各自(b))和具有序列SEQID NO：12或13的探针来检测艰难梭菌菌株的结果；图3中的数值的含义同图1(c)；