[发明专利]合成型转录因子VP64-Os03g57670的应用

说明书

技术领域

本发明属于遗传工程领域，具体地，涉及水稻转录因子Os03g57670基因的应用以及合成型转录因子VP64-Os03g57670的应用。

背景技术

水稻(Oryza sativa L.)是我国和全世界重要的粮食作物，也是一个重要的功能基因研究的模式植物和世界1/2以上人口的主食，与其相关的遗传学和分子生物学研究一直倍受研究者的重视，转录水平的调控是基因表达调控的重要方式。从分子生物学的角度来说，植物的生长发育是一个有次序的、选择性的基因表达过程。而转录因子在基因的精确调控中起到了关键性的作用。

LOB（Lateral Organ Boundaries）家族转录因子在侧生组织发育中具有重要的调控功能。LOB基因在从幼苗顶端分裂组织中形成的所有侧生组织的近轴基部表达，并在侧根的基部表达。拟南芥中发现有43个LOB domian基因，被分为2个类别和三个亚类。拟南芥中的LBD基因AS2(ASYMMETRIC LEAVES2)被发现在叶脉络系统的建立中起作用，包括中主叶脉，对称叶片的发育。LBD基因家族有着大约100个氨基酸的保守区域，4个保守的半胱氨酸大多数拟，南芥LBD基因蛋白质序列包含一个盘绕圈结构，其中有4个亮氨酸LXLXLXL序列。

LOB基因编码的蛋白是一个植物特有的，包括一个保守区域（LOB domain），该保守区域存在于其他42个拟南芥蛋白质中，同时也存在于其他植物物种之中。LOB基因在特定的环境下是拟南芥生长需要的，但是缺失LOB基因的拟南芥突变体在标准条件下没有明显的表型，可能存在功能冗余现象。有研究报道LOB基因的异位表达导致叶片和花的大小、形状发生变化，可以导致雄性和雌性不育。

水稻中LOB基因分为两个亚种，其中水稻LBD基因家族中一员ARL1对不定根原基的形成是必要的，它在不定根的形成过程中起着至关重要的作用，虽然ARL1的表达不仅仅局限于不定根。这些研究为我们进一步研究水稻LOB基因家族的功能提供很好的借鉴。目前LOB家族对叶的发育有初步的研究，但是对种子大小形状调控机制的研究及认识很少。

通过简单过表达转录因子是改变转基因材料性状的常用途径。然而由于某些转录因子作用较弱，简单过表达往往不能导致转基因受体表现显著的性状改变。VP64是4个VP16转录激活功能域基序融合在一起组成的，是一类增强子。VP16最早在动物病毒基因中发现，现在已被广泛的应用到植物中主要用于植物基因的转录控制的研究中。当转录因子和VP16功能域基序融合之后，它就会增强转录因子的激活基因表达功能，在转基因植株中容易出现更明显的表型变化。

发明内容

本发明的目的在于提供水稻转录因子Os03g57670基因的应用以及合成型转录因子VP64-Os03g57670的应用。Os03g57670基因属于LOB家族。

为了实现本发明目的，本发明首先提供一种融合蛋白，该融合蛋白为（VP16）_n-Linker-Os03g57670；其中，n为≥1的整数；Linker由1～50个柔性氨基酸串联而成。本发明实施例中linker的氨基酸序列为INYPYDVPDYAGSYPYDVPDYAAQCSGTELTSLYKKAGF，其核苷酸序列是SEQ ID No.3；VP16为来自单纯疱疹病毒（Herpes simplex virus）的VP16蛋白；Os03g57670为水稻转录因子Os03g57670，其CDS序列核苷酸序列如SEQ ID No.1所示，其氨基酸序列如SEQ ID No.2所示，或该序列经替换、缺失或添加一个或几个氨基酸形成的具有同等功能的氨基酸序列。

本发明提供了用于扩增Os03g57670基因的引物，

其包括正向引物F1：5'-CAAAAAAGCAGGCTTC ATGTCCCCCGGTGAGGAGGACGTGG-3'和反向引物R1：5'-CAAGAAAGCTGGGTC AGGAAACGAGAATTCAGATGCGAAG-3'。

优选地，前述融合蛋白中n为4。

其中，（VP16）₄即VP64，是由4个VP16功能域基序融合在一起组成的增强子，其核苷酸序列如SEQID No.4所示，或该序列经替换、缺失或添加一个或几个碱基形成的具有同等功能的核苷酸序列。