[发明专利]一种用于胶质瘤早期诊断的试剂盒

说明书

技术领域

本发明属于生物技术领域，涉及肿瘤诊断试剂盒，具体涉及一种新型的可用于胶质瘤早期诊断的试剂盒，该试剂盒通过检测脑脊液中的B7-H4分子，不仅可以对高危人群进行筛查，而且能够指导肿瘤分期，为寻找灵敏、特异的胶质瘤脑脊液标志物提供了基础。

背景技术

研究显示，在原发性颅内肿瘤中，脑胶质瘤发病率最高，接近40.5％。胶质瘤占儿童肿瘤的20％，也是实体瘤患儿死亡的首要病因。据调查，胶质瘤发病高峰在30-40岁，具有生存期短、复发率及死亡率高等特点。尤其是胶质母细胞瘤，其2年生存率为27.2％，5年生存率仅为9.8％，尽管近年来的综合治疗(包括手术、放疗、化疗)取得了很大进步，但最新的研究显示其中位生存期仍不到20个月。因此，如何能够对胶质瘤高危人群进行筛查及早期诊断，以便及时开始治疗、延长患者生存期，成为越来越多的科学家和医生关注的课题。

胶质瘤临床表现主要包括颅内压增高及神经功能缺失等症状体征，特异性不高，因此，当前胶质瘤的术前诊断主要依靠影像学技术，以MRI平扫加增强为主，CT为辅，此外，PET、SPECT和MRI特殊功能检查如MRS、PWI、DWI、DTI等也可用于鉴别诊断、术前评估、复发检测，但这些影像学诊断依据仍处于经验性标准的阶段，尚不能满足对脑胶质瘤进行高危人群筛查、早期诊断、与其他颅内占位病变鉴别的需求。

B7-H4作为B7家族中的新型负性共刺激分子，其在肿瘤免疫中的作用近年来备受瞩目。研究表明T淋巴细胞的充分活化是脑肿瘤免疫的关键。T细胞的活化至少需要两个信号：第一信号由T细胞表面的抗原特异性受体和抗原呈递细胞(APC)或肿瘤细胞表面的MHC抗原肽复合物结合所提供；第二信号则由APC上的共刺激分子(costimulatory molecules)与T细胞表面的相应受体结合产生，该信号能影响T细胞的活化、增殖及细胞因子分泌。共刺激分子可分为正性和负性，保持正负共刺激信号内在平衡对于维持机体免疫系统功能正常、避免T细胞不必要的激活或抑制意义重大，而肿瘤细胞往往通过低表达正性共刺激分子或高表达负性共刺激分子来逃过机体的免疫监视。B7家族包含了许多重要的协同刺激分子，如B7-1、B7-2、B7-H1等，可促进或抑制T细胞增殖和细胞因子产生，对B细胞活化、抗体产生也发挥重要调节作用。DM Kuang等发现在肝癌基质中B7-H1阳性巨噬细胞能抑制肿瘤特异性T细胞免疫，并且该群巨噬细胞在肝癌中的聚集密度与肝癌病人的预后呈负相关。对于新近发现的B7-H4，已有研究确认了脑肿瘤干细胞(brain tumor stem cells)可以通过B7-H1/B7-H4途径发生免疫逃逸。

随着对B7-H4研究的深入，有部分学者开始着眼于B7-H4与肿瘤预后的关系。Arigami等发现肿瘤组织中B7-H4的含量与胃癌病人的分期、5年生存率显著相关，并可以作为胃癌预后的独立影响因素，此外，他们还研究了外周血淋巴细胞B7-H4表达量的生存分析，并得到了类似的结果。Chen等进行了食管鳞状上皮细胞癌的免疫组化，经分析也证实了B7-H4高表达的肿瘤病人呈现更差的预后。肾癌、黑色素瘤领域也相继证明了B7-H4在肿瘤预后方面的重要性。其中，最引人瞩目的是Irish等的研究，他们发现卵巢癌中B7-H4的表达独立于CA125，若将血清B7-H4单独用于诊断，特异度为97％时灵敏度可达45％，而如果将B7-H4与CA125联合，灵敏度可提高至65％优于传统的CA125诊断方法。这些都提示B7-H4将可作为一种新型肿瘤标志物。

ELISA(酶联免疫吸附测定)技术是将可溶性的抗原或抗体吸附到聚苯乙烯等固相载体上，进行免疫反应的定性和定量方法。其基本原理是首先制备酶标抗原或抗体，即使抗原或抗体与某种酶连接，既保留其免疫活性，又保留酶的活性，然后把受检标本(测定其中的抗体或抗原)和酶标抗原或抗体按不同的步骤与固相载体表面的抗原或抗体起反应，洗涤纯化固相载体上形成的抗原抗体复合物，使得结合在固相载体上的酶量与标本中受检物质的量成一定的比例，最后加入酶反应的底物，底物被酶催化变成的有色产物的量与标本中受检物质的量直接相关，故可根据颜色反应的深浅进行定性或定量分析。因此，鉴于ELISA法具有操作简单、敏感度高、可定量的优点，本发明的申请人拟通过用ELISA检测脑脊液B7-H4含量，建立一种能对胶质瘤患者进行早期筛查、诊断、鉴别诊断的方法，这对胶质瘤的预防、治疗均有重大意义。

发明内容

本发明的目的是提供新的胶质瘤肿瘤标志物B7-H4，本发明通过研究负性共刺激分子B7-H4在胶质瘤病人脑脊液中的表达情况，提出了B7-H4可作为胶质瘤肿瘤标志物；