[发明专利]一种肌细胞生成素（MyoG）基因的增强子

说明书

技术领域

本发明涉及一种肌细胞生成素（MyoG是myogenin的缩写）基因的增强子，属于遗传工程技术领域。 

背景技术

真核生物基因组中含有基因调节表达的转录调控元件。如启动子、增强子和沉默子等。核心启动子及增强子，以及转录因子与启动子复合物对基因表达的调控具有十分重要的作用。实际上除了核心启动子元件，其他启动子区域的调控元件在细胞特异性基因转录过程中亦具有十分重要的作用。因此，对于肌肉特异性启动子调控元件的研究具有重要研究价值。其中增强子能够增强启动子转录活性。主要位于启动子上游，可远离转录起始点（1～50kb）。也可位于基因内部和下游序列。如很多基因的内含子就是重要的增强子。多数哺乳动物基因启动子和增强子都有组织特异性，但强弱有别。特异性主要由增强子决定。增强子通过与基因调节蛋白（特定转录因子）结合来调节基因的表达。但每一种细胞中基因调节蛋白的种类和数量是不一样的。这就决定了细胞的特异性。目前对于乳腺特异性启动子研究很多，例如羊β-酪蛋白基因启动子特异性很强，仅在乳腺上皮细胞表达，而对于肌肉分化过程中相关基因特异性启动子和增强子的研究较少被关注。 

增强子(enhancer)指增加同它连锁的基因转录频率的DNA序列。增强子是通过启动子来增加转录的。有效的增强子可以位于基因的5′ 端，也可位于基因的3′ 端，有的还可位于基因的内含子中。增强子的效应很明显，一般能使基因转录频率增加10～200倍，有的甚至可以高达上千倍。例如，人珠蛋白基因的表达水平在巨细胞病毒(cytomegalovirus，CMV)增强子作用下可提高600～1 000倍。增强子的作用同增强子的取向(5′ -3′ 或3′ -5′)无关，甚至远离靶基因达几千kb也仍有增强作用。 

增强子的发现：1981年Benerji在SV40DNA中发现一个140bp的序列，它能大大提高SV40DNA/兔β—血红蛋白融合基因的表达水平，这是发现的第一个增强子。它位于SV40早期基因的上游，由两个正向重复序列组成，每个长72 bp。目前发现的增强子多半是重复序列，一般长50bp，通常有一个8-12bp组成的“核心”序列，如SV40增强子的核心序列是5′ -GGTGTGGAAAG-3′。 

增强子的分类：增强子可分为细胞专一性增强子和诱导性增强子两类：①组织和细胞专一性增强子。许多增强子的增强效应有很高的组织细胞专一性，只有在特定的转录因子(蛋白质)参与下，才能发挥其功能。②诱导性增强子。这种增强子的活性通常要有特定的启动子参与。例如，金属硫蛋白基因可以在多种组织细胞中转录，又可受类固醇激素、锌、镉和生长因子等的诱导而提高转录水平。增强子能大大增强启动子的活性。增强子有别于启动子处有两点:[1]增强子对于启动子的位置不固定，而能有很大的变动;[2]它能在两个方向产生相互作用。一个增强子并不限于促进某一特殊启动子的转录，它能刺激在它附近的任一启动子。首先被发现的增强子是SV40增强子。两个增强子位于基因组的两个串连的72nbp重复中，约在转录起始点上游200bp处，每个72bp重复中有一个。缺失实验显示两个重复缺失一个并不产生什么影响，而如两个均缺失即将大大降低活体内的转录。有人发现，如果将β珠蛋白基因放在含有72bp重复的DNA分子中，它的转录作用在活体内将增高约200倍以上，甚至当此72bp顺序位于离转录起点上游1400bp或下游3000bp时仍有作用。各个基因中的增强子顺序差别较大，但有一个基本的核心顺序(core sequence)：AAAGGTGTGGGTTTGG 。