[发明专利]一种氯代二苯甲酮化合物及其制备方法与应用

说明书

技术领域

本发明涉及一种氯代二苯甲酮化合物及其制备方法与作为抗菌剂的应用。

背景技术

海洋微生物独特的生存环境(高压、高盐、缺氧、避光等)，使其成为新型、具有特殊活性的天然产物的重要来源，同时也是创新药物研究和开发的宝贵资源。拟盘多毛孢菌Pestalotiopsis sp.是一类常见的真菌，广泛存在于动植物以及海洋生物中。自1996年从陆生真菌Pestalotiopsis microspora中发现抗癌药紫杉醇以来，国内外已从拟盘多毛孢菌中得到了各种结构类型的化合物，包括萜类、生物碱、酚类、内酯类等多种类型，其中很多具有较好的生物活性，包括抑菌、抗肿瘤、抗氧化、酶抑制剂等。通常所研究的该菌株多是从热带植物或是腐生植物中分离到的，对海洋来源的拟盘多毛孢菌的次级代谢产物的研究较少。近年来，细菌耐药性问题给抗菌药的临床用药带来严重问题。为了减少耐药性的产生，急需开发新的高敏或选择性抗菌药物。目前使用的抗菌剂主要是广谱抗菌制剂，选择性较差。近年来尚未见到从海洋微生物中获得具有重要抗菌价值的海洋天然选择性抗菌剂。

发明内容

本发明的目的在于提供一种来源于软珊瑚Sarcophyton sp.共附生真菌Pestalotiopsis sp.的氯代二苯甲酮化合物及其制备方法与作为抗菌剂的应用，它能满足现有技术的上述需求。菌种保藏信息：保藏单位名称：中国科学院微生物研究所；保藏单位地址：北京市朝阳区北辰西路1号院3号；保藏日期：2012年12月17日；保藏编号：CGMCC6960；分类命名：拟盘多毛孢菌Pestalotiopsis sp.。

一种氯代二苯甲酮化合物，其特征在于它的结构式为

上述氯代二苯甲酮化合物的制备方法，其特征在于先在菌种培养基中对软珊瑚共附生真菌Pestalotiopsis sp.(HM486429)进行菌种培养，再在发酵培养基中对该真菌进行发酵培养，然后将所得菌丝体用乙酸乙酯和氯仿-甲醇混合液(1∶1)各浸提3次，减压浓缩得相提物浸膏，将浸膏进行减压硅胶柱层析，用石油醚-乙酸乙酯梯度洗脱，再经Sephadex LH-20凝胶柱层析及制备高效液相色谱等分离方法得到pestalachloride D。

上述的氯代二苯甲酮化合物在制备抗菌剂中的应用。

本发明从软珊瑚Sarcophyton sp.共附生真菌Pestalotiopsis sp.中获得新的氯代二苯甲酮化合物，对海洋细菌副溶血弧菌(Vibrio parahaemolyticus)、弧鳗菌(Vibrio anguillarum)以及大肠杆菌(Escherichia coli)具有选择性抑制活性，可用于开发选择性抗菌剂。斑马鱼生物活性结果显示，化合物pestalachloride D对斑马鱼无明显毒性，而pestalachloride D的差向异构体pestalachloride C则在斑马鱼致死、亚致死、致畸等方面均表现出了较强的胚胎毒性，说明氯代二苯甲酮衍生物的差向异构体对斑马鱼的活性具有明显的差异。

具体实施方式

本发明的化合物的制备

(1)软珊瑚共附生真菌的菌种培养

软珊瑚共附生真菌Pestalotiopsis sp.(HM486429)的菌种培养所用的培养基含有葡萄糖1.0％(重量百分比，下同)、酵母膏0.2％、蛋白胨0.2％、琼脂1.0％、氯化钠3.0％，其余为水，使用时制成试管斜面，真菌菌株在30℃下培养5天。

所述的菌种培养基含有葡萄糖0.1％-5.0％(重量百分比，下同)、酵母膏0.01％-1％、蛋白胨0.01％-1％、琼脂0.1％-3.0％、氯化钠0.05％-5％，其余为水。

(2)软珊瑚共附生真菌的发酵

软珊瑚共附生真菌Pestalotiopsis sp.(HM486429)的发酵培养所用的发酵培养基含有葡萄糖1.0％(重量百分比，下同)、酵母膏0.2％、蛋白胨0.2％、氯化钠3.0％，其余为水，真菌菌株于28℃培养30天。

所述的发酵培养基含有葡萄糖0.1％-5.0％(重量百分比，下同)、酵母膏0.01％-1％、蛋白胨0.01％-1％、氯化钠0.05％-5％，其余为水。

(3)化合物的提取分离

将所得发酵液过滤，分为菌丝体和发酵液。菌丝体用乙酸乙酯和氯仿-甲醇混合液(1∶1)各浸提3次，减压浓缩得粗提物浸膏，进行层析分离，洗脱液分别浓缩得白色粉末，即为pestalachloride D。