[发明专利]一种艾塞那肽的制备方法

说明书

技术领域

本发明涉及一种工业化大规模制备艾塞那肽的方法，特别涉及采用固相合成法制备艾塞那肽，属于多肽合成技术领域。

背景技术

糖尿病是由多种病因引起的以慢性高血糖为特征的代谢紊乱疾病，高血糖主要是由于胰岛素分泌或作用的缺陷引起。全世界糖尿病患者已超过1.5亿，其中Ⅱ型糖尿病患者占90%以上。

艾塞那肽是一种治疗II型糖尿病的药物，由美国礼来公司开发，属于肠促胰岛素类似物，是肠促胰岛素类似物家族的第一个成员，可以模拟自然状态下分泌的人胰高血糖素样肽-1(GLP-1)在体内的生理行为，与GLP-1的效果类似，可促进葡萄糖依赖的胰岛素分泌，抑制不适当的葡萄糖依赖的胰高血糖素分泌，减慢胃排空，改善外周组织对胰岛素的敏感性，充分控制血糖。临床上主要用于治疗二甲双胍、磺酰脲类或二甲双胍和磺酰脲类联合应用不能很好控制血糖的II型糖尿病。

艾塞那肽是一个由39个氨基酸组成的多肽，具有如下结构：

H-His-Gly-Glu-Gly-Thr-Phe-Thr-Ser-Asp-Leu-Ser-Lys-Gln-Met-Glu-Glu-Glu-Ala-Val-Arg-Leu-Phe-Ile-Glu-Trp-Leu-Lys-Asn-Gly-Gly-Pro-Ser-Ser-Gly-Ala-Pro-Pro-Pro-Ser-NH₂。

目前艾塞那肽的制备工艺主要有三种：一种是利用基因重组技术获得艾塞那肽的全序列，参见CN1635117A、CN1693459A中公开的方法。

第二种是采用液相合成艾塞那肽，或者固相和液相结合制备艾塞那肽，比如WO2006119388先用固相法合成艾塞那肽类似物，再在液相中合成艾塞那肽；CN101835794A公开了用固相化学法合成三个不同的肽中间片段，然后再用液相化学将另外的氨基酸物质添加至片段上；WO2011006644公开了用固相化学合成四个艾塞那肽片段，再将几个片段在液相中偶联得到艾塞那肽。

第三种方法是固相合成法。由于液相合成艾塞那肽步骤复杂，工艺控制点较多，副产物多，工艺不稳定，因此，艾塞那肽多采用第三种方法固相合成法来制备，比如US6902744、CN101538324、CN101357938中均公开了采用固相化学合成艾塞那肽的方法，用氨基树脂依次连接具有Fmoc保护基团的氨基酸，先制备得到侧链保护的由三十九个氨基酸成链的艾塞那肽-树脂，然后将艾塞那肽分子从树脂上切割下来，再经过多次纯化制得艾塞那肽。由于艾塞那肽分子中第[1-2]肽片段为His-Gly，在固相化学法依次接入Fmoc-Gly以及Fmoc-His(Trt)过程，由于Gly和His这两个氨基酸的分子特性，导致产品中产生以下的杂质：艾塞那肽[D-His¹]、艾塞那肽[Des Gly²]，这些杂质与艾塞那肽自身的极性非常相近，在纯化的过程中很难完全去除，产品收率无法得到有效的提高，导致产品纯度降低，影响产品的质量以及用药安全。

发明内容

针对现有技术的不足，本发明提供一种采用固相合成法制备艾塞那肽的方法，可用于工业上大规模生产艾塞那肽。

术语说明：

氨基树脂：由含有氨基或酰胺基的单体与醛类(主要是甲醛)缩聚而得的热固性树脂。

侧链保护基团：指与氨基酸的侧链（即氨基酸通式H₂N-C(R)(H)-COOH中的R基）偶联的化学部分，其有助于防止侧链的一部分与肽合成、加工等步骤中使用的化学物质反应。

缩合剂：能引起缩合反应的试剂，在多肽合成中，尤指能促进氨基与羧基偶联形成肽键的试剂。

活化助剂：在多肽缩合反应中，能够协助缩合剂更好的促进缩合反应的试剂，如：抑制缩合反应中消旋杂质的产生、催化加快反应速度等。

本发明的技术方案如下：

一种艾塞那肽的制备方法，包括步骤如下：

（1）以氨基树脂为原料，加入脱保护剂，脱除所述氨基树脂上的Fmoc保护基；

（2）将步骤（1）脱除Fmoc保护基的氨基树脂采用逐一偶联的方式依次连接Fmoc保护的氨基酸，所述的偶联是在活化助剂和缩合剂存在下进行的固相偶联反应，以茚三酮检测阴性为反应终点，反应完毕用脱保护剂脱除Fmoc保护基，再与下一个Fmoc保护的氨基酸进行固相偶联反应；重复操作直至合成得到侧链全保护艾塞那肽[3-39]肽-树脂：