[发明专利]蛋白质等电聚焦电泳的方法及其装置无效
申请号: | 201310113855.0 | 申请日: | 2013-04-02 |
公开(公告)号: | CN103235026A | 公开(公告)日: | 2013-08-07 |
发明(设计)人: | 曹成喜;郭陈刚;刘小平;李思;王后禹 | 申请(专利权)人: | 上海交通大学 |
主分类号: | G01N27/447 | 分类号: | G01N27/447 |
代理公司: | 上海交达专利事务所 31201 | 代理人: | 王毓理;王锡麟 |
地址: | 200240 *** | 国省代码: | 上海;31 |
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摘要: | |||
搜索关键词: | 蛋白质 聚焦 电泳 方法 及其 装置 | ||
1.一种蛋白质等电聚焦电泳的pH梯度控制方法,其特征在于,首先制备含有电极液的多孔亲水材料作为酸性垫和碱性垫,然后将酸性垫置于电泳槽内的阳极与经过水化上样的固化或非固化pH梯度胶条的一端之间,将碱性垫置于阴极与胶条的另一端之间,且并轻压固定以实现电连接,最后滴加硅油覆盖整个电泳槽内并施加直流电压,通过逐步增加电压实现等电聚焦电泳测试。
2.根据权利要求1所述的方法,其特征是,在基于MRB的稳定pH梯度控制时,所述的酸性垫为酸性电极液垫,其中所含的电极液为:H2SO4、HCl、HBr、HI、HNO3、CH3COOH、H3PO4、或者上述混合溶液的酸性电解质,但HF除外,酸性电极液浓度为5mM~200mM;所述的碱性垫为碱性电极液垫,其中的电极液为:NaOH、NH4OH、H2NCH2CH2NH2、或者上述混合溶液的碱性电解质,但KOH除外,碱性性电极液浓度为5mM~200mM;
在基于MRB和扩散技术设计非线性pH梯度调控时,所述的酸性垫为酸性扩散调控垫,其中所含的电极液为:H2SO4、HCl、HBr、HI、HNO3、CH3COOH、H3PO4、或者上述混合溶液的酸性电解质,浓度为150mM~2000mM;所述的碱性垫为碱性电极液垫,其中的电极液为:NaOH、NH4OH、H2NCH2CH2NH2、或者上述混合溶液的碱性电解质,浓度为150mM~2000mM。
3.根据权利要求1或2所述的方法,其特征是,所述的酸性垫和碱性垫以及的基材为:滤纸、脱脂棉、海绵或无纺布,其长度是与所在的电泳槽两端电极到电泳槽道端部之间的距离相适应。
4.一种实现上述任一项权利要求所述的方法的非固化pH梯度胶条,其特征在于,包括:包含具有亲水面的能与聚丙烯酰胺凝胶聚合的凝胶支持膜、具有承载蛋白质样品并与支持膜键合的抗对流介质、具有形成pH梯度的两性载体电解质和用于储存保护等胶条的保护膜。
5.根据权利要求4所述的非固化pH梯度胶条,其特征是,所述的凝胶支持膜的其中一面是具有乙烯基团,以便与聚丙烯酰胺凝胶牢固键合。
6.根据权利要求4所述的非固化pH梯度胶条,其特征是,所述的抗对流介质材料由聚丙烯酰胺凝胶,其浓度T为2%至10,交联度C为2%至6%。
7.一种实现上述任一项权利要求所述的电泳槽,其特征在于,包括:设有若干个槽道的聚焦槽框架、散热底板、用于压制酸性垫或碱性垫的盖板和电极部件,其中:聚焦槽框架和散热底板相互契合,电极部件固定于聚焦槽框架和散热底板之间,盖板与散热底板相互配合。
8.根据权利要求7所述的装置,其特征是,所述的聚焦槽框架有楔形头且与散热底板上的楔形孔相配合。
9.根据权利要求7或8所述的装置,其特征是,所述的聚焦槽框架有定位孔且与盖板上的定位片相配合。
10.根据权利要求7所述的装置,其特征是,所述的电极部件包括:相互接触的电极丝和电极片,其中:电极丝的电极丝环贴在环聚焦槽框架上所开的电极螺丝孔上。
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