[发明专利]孕马血清促性腺激素的提纯方法

权利要求书

1.一种孕马血清促性腺激素的提纯方法，包括以下步骤：

(1)偏磷酸沉淀：在孕马血清中加入偏磷酸，过滤收集沉淀物和上清液；

(2)乙醇清洗：在步骤(1)收集的沉淀物中加入与沉淀物等重量的无水乙醇，搅拌、过滤收集乙醇清洗液，弃沉淀；

(3)辛酸沉淀：在步骤(1)收集的上清液中加入辛酸，搅拌、离心、过滤收集上清液，弃沉淀；

(4)盐析沉淀：将步骤(2)收集的乙醇清洗液和将步骤(3)收集的上清液合并，在20～22℃的温度下，按照1000毫升液体加600～700克硫酸铵的比例加入硫酸铵，充分搅拌溶解，过滤收集沉淀，弃上清液；

(5)透析除盐：将步骤(4)收集的沉淀物包于透析袋内，流水透析除去硫酸铵，收集透析袋内的保留液；

(6)低浓度乙醇沉淀：在步骤(5)收集的保留液中加入乙醇浓度至42～46％，搅拌、过滤收集上清液，弃沉淀；

(7)高浓度乙醇沉淀：在步骤(6)收集的上清液中补充加入乙醇浓度至74～76％，搅拌、离心、过滤收集沉淀，弃上清液；

(8)透析清洗：将步骤(7)收集的沉淀物包于透析袋内，流水透析清洗，收集透析袋内的保留液，得到高纯度的孕马血清促性腺激素(PMSG)液体制品。

2.按照权利要求1所述的孕马血清促性腺激素的提纯方法，其特征在于：

(1)偏磷酸沉淀：在孕马血清中边搅拌边缓慢加入0.4～0.5mol/L偏磷酸HPO₃，至溶液pH值为3.1～3.3时，停止加酸和搅拌，滤收集沉淀物和上清液；

(2)乙醇清洗：在步骤(1)收集的沉淀物中加入与沉淀物等重量的无水乙醇，搅拌过滤，收集乙醇清洗液，弃沉淀；

(3)辛酸沉淀：在步骤(1)收集的上清液中滴加2mol/L的氢氧化钠调节pH值至4.4～4.6；然后按照1000毫升上清液加20～30毫升辛酸的比例，边搅拌边缓慢加入辛酸，产生沉淀之后，离心、过滤收集上清液，弃沉淀；

(4)盐析沉淀：将步骤(2)收集的乙醇清洗液和将步骤(3)收集的上清液合并，在20～22℃的温度下，按照1000毫升液体加600～700克硫酸铵的比例加入硫酸铵，充分搅拌溶解，过滤收集沉淀，弃上清液；

(5)透析除盐：将步骤(4)收集的沉淀物包于透析袋内，流水透析除去硫酸铵，使得透析袋内保留液中的铵根离子小于0.1％，收集透析袋内的保留液；

(6)低浓度乙醇沉淀：在步骤(5)收集的保留液中加入-20～-80℃的预冷乙醇浓度至42～46％，用2mol/L氢氧化钠调解pH值为5.0～5.4，过滤收集上清液，弃沉淀；

(7)高浓度乙醇沉淀：在步骤(6)收集的上清液中补充加入-20～-80℃的预冷乙醇浓度至72～80％，用2mol/L氢氧化钠调解pH值为4.0～4.4，离心收集沉淀，弃上清液；

(8)透析清洗：将步骤(7)收集的沉淀物包于透析袋内，流水透析清洗22-48小时，用2mol/L氢氧化钠调解pH值为6.8～7.2，收集透析袋内的保留液，得到高纯度的孕马血清促性腺激素(PMSG)液体制品。