[发明专利]同步检测黄曲霉毒素、赭曲霉毒素A和玉米赤霉烯酮混合污染的免疫层析试纸条及制备方法

说明书

技术领域

本发明提供了一种同步检测黄曲霉毒素、赭曲霉毒素A和玉米赤霉烯酮混合污染的免疫层析试纸条及制备方法。 

背景技术

真菌毒素是真菌在食品或饲料里生长所产生的代谢产物，粮食和饲料在收获时未被充分干燥或贮运过程中温度或湿度过高，就可能为真菌的生长繁殖提供适宜条件，从而引起真菌毒素的污染。黄曲霉毒素、赭曲霉毒素和玉米赤霉烯酮是粮食饲料中常见的真菌毒素。黄曲霉毒素主要由黄曲霉和寄生曲霉产生，赭曲霉毒素主要由多种曲霉和青霉产生，玉米赤霉烯酮主要由禾谷镰刀菌产生，三种真菌毒素在粮食包括小麦、玉米、大麦、燕麦、黑麦、大米和黍类等及花生、豆类等粮食和饲料中广泛发生。真菌毒素对人和动物都有极大危害，黄曲霉毒素能强烈破坏人和动物的肝脏组织，严重时会导致肝癌甚至死亡；赭曲霉毒素主要引起肾脏损伤，大量的毒素也可能引起动物的肠黏膜炎症和坏死；玉米赤霉烯酮具有雌激素样作用，能造成动物急慢性中毒，引起动物繁殖机能异常甚至死亡。鉴于真菌毒素的危害作用及其在粮食和饲料中的广泛发生，世界各国对其含量进行了严格限定。因此为了加强对粮食和饲料中这些真菌毒素的检测，尤其是快速检测，是了解和掌握食品及饲料安全卫生信息，增强食品安全消费的重要环节。 

现有对黄曲霉毒素、赭曲霉毒素A和玉米赤霉烯酮三种真菌毒素的检测方法主要包括薄层层析法、精密仪器分析法和免疫学分析法。薄层层析法检测真菌毒素时，不需要特殊的仪器设备，在一般实验室都可进行，但检测试剂用量大、操作繁琐、其它组分干扰严重、准确性差，不能准确定量，且对实验人员和周围环境污染危害较大，不适于现场快速检测。精密仪器分析法包括高效液相色谱法、液相色谱与质谱及串联质谱联用的方法，其灵敏度高，准确性好，但仪器昂贵，要求所检测的样品的纯化程度高，样品前处理过程繁琐，耗时长，对实验环境和检测人员要求高，难以实现快速检测，检测成本高。免疫分析方法克服了薄层层析法和仪器分析法的缺点，由于其特异性强、灵敏度高、样品前处理简单、成本低、对实验人员和周围环境的污染危害小、适于现场批量检测等优点在近年来获得了快速发展。基于胶体金标记抗体与抗原特异性结合反应的免疫层析试纸条的检测结果肉眼可见，不需要大型仪器设备，检测成本低，分析时间短，从而可实现对各种真菌毒素等微量残留物的定 性、在线、快速检测。然而现有用于真菌毒素检测的免疫层析试纸条大都主要只能检测一种真菌毒素。而我国小农户分散型的种植方式，农产品中真菌毒素发生率高，且同一农产品受多种真菌毒素污染的可能性大，因此迫切需要能快速、同步检测多种真菌毒素的检测技术，以实现对粮食及饲料中多种真菌毒素的同步、快速、准确监测。 

发明内容

本发明所要解决的问题是提供一种同步检测黄曲霉毒素、赭曲霉毒素A和玉米赤霉烯酮混合污染的免疫层析试纸条及制备方法。其可用于样品中黄曲霉毒素，赭曲霉毒素A和玉米赤霉烯酮三种真菌毒素含量的同步检测，具有操作简单、快速、灵敏度高的特点。 

为解决上述技术问题，本发明所采用的技术方案为： 

同步检测黄曲霉毒素、赭曲霉毒素A和玉米赤霉烯酮混合污染的免疫层析试纸条(见图1和图2)，包括纸板，纸板的一面从上到下依次粘贴吸水垫、检测垫、金标垫和样品垫，相邻各垫在连接处交叠连接，所述检测垫以硝酸纤维素膜为基垫，硝酸纤维素膜上设有横向质控线和检测线，所述检测线位于质控线的下方，个数为三条，呈间隔分布，所述三条检测线上分别包被有赭曲霉毒素A-牛血清白蛋白偶联物(OTA-BSA)、玉米赤霉烯酮-牛血清白蛋白偶联物(ZEA-BSA)和黄曲霉毒素B1-牛血清白蛋白偶联物(AFB1-BSA)，所述质控线包被有兔抗鼠多克隆抗体；所述金标垫横向喷涂有纳米金标记的抗黄曲霉毒素通用单克隆抗体、纳米金标记的抗赭曲霉毒素A单克隆抗体和纳米金标记的抗玉米赤霉烯酮单克隆抗体；所述抗黄曲霉毒素通用单克隆抗体由保藏编号为CCTCC NO.C201013的杂交瘤细胞株1C11分泌产生，抗赭曲霉毒素A单克隆抗体由保藏编号为CCTCC NO.C201329的杂交瘤细胞株1H2分泌产生，抗玉米赤霉烯酮单克隆抗体由保藏编号为CCTCC NO.C201328的杂交瘤细胞株2D3分泌产生。 

按上述方案，所述的吸水垫长16～18mm，宽3～4mm，检测垫长18～30mm，宽3～4mm；金标垫长10～12mm，宽3～4mm；样品垫长12～15mm，宽3～4mm，相邻各垫的交叠长度为1～3mm。 

按上述方案，所述的吸水垫为吸水纸。