[发明专利]变形杆菌多种血清型菌株特异性引物及多重PCR检测方法

说明书

技术领域

本发明涉及一种多重PCR快速检测的方法及其应用，尤其涉及一种可同时用于检测变形杆菌血清型1-4型等一直到60型48种菌株的PCR技术及其所用PCR引物的序列。

背景技术

变形杆菌（Proteus）属于革兰氏阴性细菌，广泛存在于水、土壤腐败的有机物以及人和动物的肠道中，对分解有机物和动物蛋白起着重要的作用，在有氧或特许条件的厌氧环境中都具有蛋白水解酶的活性。变形杆菌为条件致病菌，多为继发感染，如慢性中耳炎、创伤感染等，也可引起膀胱炎、婴儿腹泻、食物中毒等。

目前最新的分类定为普通变形杆菌属包括普通变形杆菌(P. vulgaris)、奇异变形菌(P. mirabilis)、彭氏变形杆菌(P. penneri)、产粘液变形杆菌(P. myxofaciens)和P. hauseri五个种以及3个未命名的变形杆菌genomospecies 4,5和6。在变形杆菌中普通变形杆菌、奇异变形杆菌和彭氏变形杆菌具有一定致病性,其他种中很少发现有致病菌。

普通变形杆菌和奇异变形杆菌根据O抗原的不同最初一共被分为49个血清型，之后又发现了11种新的血清型，因此，目前将普通变形杆菌和奇异变形杆菌一共定义为60种血清型。此外，彭氏变形杆菌具有15种O抗原血清型。

传统技术检测病原微生物的方法是对细菌进行培养后在生化和血清学水平进行鉴定，需要经过至少48小时的细菌培养和单菌落的分析，并需要对每一个样品的大量单菌落使用多种抗血清进行凝集反应，耗时长，并且有漏检的可能。同时，血清学方法还有一个缺陷，就是受抗血清的限制，世界上没有一个公司或单位能生产全部细菌的抗血清。

PCR技术是目前公认的在病原微生物检测领域最快、最有效的技术之一。PCR技术的优点是快速灵敏，已成为微生物检测技术的重要发展趋势。筛选针对病原微生物的特异DNA分子标识是研制病原微生物的PCR技术的核心内容。目前，国际上很多企业和科研单位均在此领域投入了大量的人力物力用于筛选病原微生物的特异分子探针。

在致病微生物的鉴定中，有时只需要将其鉴定至种或属，利用16S rRNA、23S rRNA和16S-23S rRNA即可达到目的；而多数病原微生物需要鉴定到在分类上比种属更加精确的血清型水平。如何利用分子生物学技术将致病微生物（如细菌）鉴定到血清型水平是目前国际微生物检测领域研究的热点和难点之一。

发明内容