[发明专利]用于鉴别鸭瘟病毒的引物组合物及试剂盒有效
| 申请号： | 201310117452.3 | 申请日： | 2013-04-07 |
| 公开（公告）号： | CN103146848A | 公开（公告）日： | 2013-06-12 |
| 发明（设计）人： | 王继春;张传健;许梦微;王志胜;侯继波 | 申请（专利权）人： | 江苏省农业科学院 |
| 主分类号： | C12Q1/70 | 分类号： | C12Q1/70;C12Q1/68;C12N15/11;C12R1/93 |
| 代理公司： | 南京汇盛专利商标事务所(普通合伙) 32238 | 代理人： | 张立荣 |
| 地址： | 210014 江*** | 国省代码： | 江苏;32 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 用于 鉴别 瘟病 引物 组合 试剂盒 | ||
1.用于鉴别鸭瘟病毒的引物组合物，由上游引物和下游引物组成，所述上游引物和下游引物的序列分别如SEQ ID NO:1和SEQ ID NO:2所示。
2.根据权利要求1所述用于鉴别鸭瘟病毒的引物组合物，其特征在于：所述上游和下游引物的浓度为0.01mol/ml。
3.用于鉴别鸭瘟病毒的试剂盒，包括权利要求1或2所述引物组合物、PCR缓冲液、dNTPs和ExTaq酶。
4.根据权利要求3所述用于鉴别鸭瘟病毒的试剂盒，其特征在于:所述dNTPs为dATP、dTTP、dGTP和dCTP的等浓度混合物，所述dATP、dTTP、dGTP或dCTP的浓度均为2.5mM；
权利要求1或2所述引物组合物在制备用于鉴别鸭瘟病毒的试剂盒中的应用。
5.一种应用权利要求1或2所述引物组合物鉴别鸭瘟病毒的方法：
（1）提取待检样品的DNA；
（2）以步骤（1）中所述DNA为模板，用权利要求1或2所述引物组合物为引物，进行PCR扩增反应，获得PCR产物；
（3）将PCR产物进行琼脂糖凝胶电泳，判断所述PCR产物的长度；当PCR产物长度为4430-4460bp时，待检样品感染中国来源的鸭瘟病毒强毒株；当PCR产物长度为3260-3290bp时，待检样品感染欧洲来源的鸭瘟病毒强毒株；当PCR产物长度为920-950bp，待检样品感染中国来源的鸭瘟病毒VAC株；当PCR产物长度为2510-2540bp，待检样品感染中国来源的鸭瘟病毒Clone-03。
6.根据权利要求6所述鉴别鸭瘟病毒的方法，其特征在于：所述中国来源的鸭瘟病毒强毒株为鸭瘟病毒LH2011株和CHv株中的一种或两种；所述欧洲来源的鸭瘟病毒强毒株为鸭瘟病毒Jansen、Holland、D11-JW-016和v2085株中的一种或两种以上。
7.根据权利要求7所述鉴别鸭瘟病毒的方法，其特征在于步骤（2）中PCR扩增反应的条件为： 94℃预变性3min；94℃变性30sec，52℃退火40sec，72℃延伸3min40sec，循环40次；最后72℃延伸10min。
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