[发明专利]一种优秀冰雪运动员富集cDNA文库及其构建方法

说明书

技术领域

本发明涉及一种cDNA文库及其构建方法，具体地说是利用多名优秀冰雪运动员血液样品通过提取总RNA、混合总RNA，合成双链cDNA、蛋白酶K消化、Sfi1酶切并连接入载体、λ噬菌体的包装，最终获得优秀冰雪运动员富集cDNA文库。 

背景技术

人类遗传资源是人类进行自身探索与研究不可替代的资源。人类遗传资源指代表人类基因的遗传材料，在现今世界，最能代表人类自身身体素质基因的人群，便是各个运动项目的优秀运动员。作为人类遗传资源的一部分，运动基因遗传资源是人类宝贵的财富，但是由于运动基因遗传资源仅存在于运动员个体的局限性，如果对优秀的运动员不采取保护性的基因保存工作，任其退役后运动能力逐渐消退直至死亡，无疑是我国体育事业的巨大损失。因此，在人类还没有更合理科学的开发利用运动基因遗传资源之前，有效地保存并对其进行必要的研究就显得尤其重要。 

运动基因遗传资源，与运动能力的开发有着密切的联系，随着人类基因组计划的完善，越来越多的运动基因被发现，对其功能的研究也将更加深入。我国的“人类遗传资源”项目中，标本类型包括血液、血浆、血清、组织、石蜡包块、基因组DNA以及永生细胞系等，共计完成154713份实物标本以及8320份显微图像的整理与整合。运动遗传保存方面，根据《人类遗传资源描述规范》，北京体育大学课题组已完成优秀长跑运动员永生细胞库100株永生细胞株、优秀长跑运动员DNA库的184份DNA标本，以及用于与耐力训练前后生理生化指标变化关联分析的武警士兵DNA库106份DNA标本的标准化整理整合。 

由于血液、组织样品和基因组DNA是无法复制的遗传研究材料，不适合广泛而深入的科学研究，因此急需探索一种便捷，高效，稳定的方法对运动基因遗传资源进行保存。通过构建优秀冰雪运动员组织cDNA文库无疑是保存运动基因遗传资源的有效方式。更重要的是，构建单个个体血液cDNA文库所涵盖的遗传信息量有限，通过混个多个优秀个体血液总RNA后，构建血液富集cDNA文库将更具实际价值。本专利所构建的优秀冰雪运动员富集cDNA文库就是为了可以永久的保存人类与杰出运动能力相关的基因，同时解决以往实验研究的接力式进行与标本的暂时性采集中存在的矛盾，以便有效的对同一研究对象进行持久的连续性研究。 

发明内容

本发明的目的是提供高滴度、高重组率的高质量优秀冰雪运动员血液富集cDNA文库。 

本发明的另一目的在于提供上述cDNA文库构建方法，其中利用多个优秀冰雪运动员血液样品作为材料，通过提取总RNA、混合总RNA，合成双链cDNA、蛋白酶K消化、Sfi1酶切并连接入载体、λ噬菌体的包装，最终获得高滴度、高重组率、插入片段范围大的高质量优秀冰雪运动员血液富集cDNA文库。 

为实现上述目的，本发明采取以下技术方案： 

优秀冰雪运动员血液富集cDNA文库，该文库特征在于：滴度高，重组率高，插入片段范围大。微量cDNA文库样品转化为质粒文库后就可大量筛选基因。 

而本发明所述的滴度高，重组率高，插入片段范围大的优秀冰雪运动员血液富集cDNA文库可以为分子生物学、基因工程、遗传标记和医学等基础生命科学研究提供大量优质材料。 

下面对本发明做进一步说明，以使公众对发明内容有整体和充分的了解，而并非对本发明保护范围的限定。前述部分已经充分公开了本发明可以实施的保护范围，因此凡依照本发明公开内容进行的任何本领域公知的等同替换，均属于对本发明的侵犯。 

具体实施方式

本发明首先涉及一种优秀冰雪运动员血液富集cDNA文库，其特征在于滴度高，重组率高，插入片段范围大。所述微量cDNA文库样品转化为质粒文库后就可大量筛选基因。优选地，所述cDNA文库是λ噬菌体的包装后的噬菌体文库。 

在所述cDNA文库中，其滴度通常高于10⁷pfu/ml、高于10⁸pfu/ml，优选高于10⁹pfu/ml，最优选高于10¹⁰pfu/ml。 

在所述cDNA文库中，其重组率通常高于大约85％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、或99％。优选地，重组率高于95％。 

在所述cDNA文库中，其插入片段范围一般在大约0.1、0.2、0.3、0.4、0.5、0.6、0.7、0.8、0.9或1.0kb至大约2.0、3.0、4.0、或5.0kb之间，优选在约0.2-3.0kb之间，最优选在约0.3-约2.0kb之间。