[发明专利]一种血吸虫病电化学传感快速测定试剂盒及其检测方法和制备方法

权利要求书

1.一种血吸虫病电化学传感快速测定试剂盒，其特征在于，所述试剂盒包括：电化学传感阵列、酶结合物工作液、酶底物、阴性对照品、阳性对照品、样本稀释液和洗涤液；所述电化学传感阵列包括印刷碳电极、共组装在所述印刷碳电极表面的血吸虫抗原层和吸附的封闭剂层，其中，所述血吸虫抗原为日本血吸虫重组抗原SjE16和日本血吸虫可溶性虫卵抗原SEA的混合物；所述酶结合物工作液为含有辣根过氧化酶标记的二抗的BSA溶液；所述酶底物为四甲基联苯胺与双氧水的混合物；所述阴性对照品为正常血清；所述阳性对照品为血吸虫感染血清；所述样本稀释液和洗涤液均为含有表面活性剂的磷酸盐缓冲液。

2.根据权利要求1所述的试剂盒，其特征在于，所述日本血吸虫重组抗原SjE16具有SEQ ID NO:1所示的氨基酸序列。

3.根据权利要求1所述的试剂盒，其特征在于，所述日本血吸虫重组抗原SjE16和所述日本血吸虫可溶性虫卵抗原SEA两者以4:1～64:1质量比混合。

4.根据权利要求3所述的试剂盒，其特征在于，所述日本血吸虫重组抗原SjE16和所述日本血吸虫可溶性虫卵抗原SEA两者以8:1质量比混合。

5.根据权利要求1所述的试剂盒，其特征在于，所述印刷碳电极由碳糊工作电极，碳糊对电极以及银/氯化银参比电极组成。

6.根据权利要求1所述的试剂盒，其特征在于，所述封闭剂是牛血清白蛋白或酪蛋白。

7.一种血吸虫抗体的检测方法，其特征在于，所述检测方法包括：

1）样本稀释：用样本稀释液将待检血清按1:100稀释；

2）加样反应：向每个工作电极上分别滴加已稀释的样本血清，每个样本平行检测2孔，同时设阴性、阳性及空白对照各2孔，取阴性、阳性对照品分别滴加于工作电极表面，空白对照孔仅加入样本稀释液，将电极阵列于湿盒内室温反应20-40分钟后，甩去电极表面液体，并用洗涤液冲洗，吹干电极表面；

3）加酶反应：每个工作电极表面滴加酶结合物工作液，于湿盒内室温反应20-40分钟，甩去电极表面液体，并用洗涤液冲洗；

4）电化学检测：每个通道滴加酶底物，覆盖三电极区域，于多通道电化学分析仪上进行时间电流曲线扫描，扫描电压为-100mv,扫描时间是50s。50s时的稳态电流值作为检测信号。

5）数据分析与结果判断：

定性检测：所有电流值都扣除空白对照的电流值，以阴性对照品的平均电流值的2.1倍作为阈值，待检样本电流值大于或等于阈值的样本判定为阳性样本，电流值小于阈值的样本判定为阴性样本；

半定量检测：待检样品所含的血吸虫抗体的效价为样品连续稀释电极中判定为阳性电极的最高稀释倍数的倒数，该阳性电极结果判定方法与定性检测相同。

8.一种血吸虫病电化学传感快速测定试剂盒的制备方法，其特征在于，所述制备方法包括：

电化学传感阵列的制备：滴加磷酸缓冲液覆盖三电极，于多通道电化学检测仪上进行循环伏安法扫描，冲洗电极，再在工作电极表面滴加碳二亚胺和羟基琥珀酰亚胺的羧基活化溶液，室温反应后用超纯水冲洗，再在所述工作电极表面滴加含有日本血吸虫重组抗原SjE16和日本血吸虫可溶性虫卵抗原SEA的PBS溶液，室温反应后冲洗电极，滴加封闭剂覆盖三电极，室温孵育后冲洗电极，吹干表面，备用。

9.根据权利要求8所述的制备方法，其特征在于，所述制备方法还包括：

酶结合物工作液的配置：将辣根过氧化物酶标记的二抗用1%BSA溶液稀释1000倍；

酶底物工作液的配置：将四甲基联苯胺与双氧水配置为混合溶液，棕色试剂瓶避光保存；

样本稀释液或洗涤液的配置：将Tween20加入磷酸盐缓冲液中混匀；

阴性对照品的制备：将10份正常人标准血清混合并用稀释液稀释100倍；

阳性对照品的制备：将10份血吸虫感染人标准血清混合并用稀释液稀释100倍。

10.根据权利要求8所述的制备方法，其特征在于，所述日本血吸虫重组抗原SjE16具有SEQ ID NO:1所示的氨基酸序列。

11.根据权利要求8所述的制备方法，其特征在于，所述日本血吸虫重组抗原SjE16和所述日本血吸虫可溶性虫卵抗原SEA两者以4:1～64:1质量比混合。

12.根据权利要求11所述的制备方法，其特征在于，所述日本血吸虫重组抗原SjE16和所述日本血吸虫可溶性虫卵抗原SEA两者以8:1质量比混合。